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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR电泳总是跑成狗骨头的样子，求大神帮忙找找原因哦
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莫伊2013

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by bwangel at 2014-08-19 13:53:04
你这个是多少大的marker啊，100bp的带，用500的marker跑，100V，2%的胶，记得胶溶的彻底点，怎么样都能跑出来，别用你那个marker了，

好的 我再试试
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11楼2014-08-19 14:44:50
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
莫伊2013: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-08-20 09:20:12
可以试下90V，30min。你制胶不要按次数溶解，只要沸腾了就拿出来晃晃，直至溶解完全。倒胶不宜太热，也不宜太凉，这个只要稍微烫手就可以倒了。
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12楼2014-08-19 14:51:56
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莫伊2013

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by wangranjun at 2014-08-19 12:46:33
电压降一下，降到100V，电压高的话可能会这样子的。TAE都是最近配的吗？...

还是不行啊，是不是我上样量太多了 我点了5微升。怎么搞的啊，配的TAE应该没问题的
PCR电泳总是跑成狗骨头的样子，求大神帮忙找找原因哦
Administrator 2014-08-19 16 时 38 分.jpg
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13楼2014-08-19 16:44:25
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
marker一般点个3uL就差不多了，这个胶图跑得还可以啊
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
14楼2014-08-19 16:58:12
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杨仔

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
莫伊2013(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-19 19:25:30
狗骨头样子其实不影响实验的啦。你应该是从孔中间加的样，loading密度大，惯性下沉把样品挤到两边，so……。样品适度稀释一下，加样时枪头捅下去一点（不捅穿就行），电压小一点，就能好一些。祝福楼主！
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15楼2014-08-19 17:00:44
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莫伊2013

银虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-08-19 16:58:12
marker一般点个3uL就差不多了，这个胶图跑得还可以啊

我这个是MARK啊 这样总感觉看着不舒服 现在在弄块胶 点个3微升试试
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16楼2014-08-19 17:07:08
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beautybanana

木虫 (著名写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 莫伊2013 at 2014-08-19 16:44:25
还是不行啊，是不是我上样量太多了 我点了5微升。怎么搞的啊，配的TAE应该没问题的

Administrator 2014-08-19 16 时 38 分.jpg
...

marker 你点2ul 就可以了, 5ul 的上样量大了. 电压100V左右就可以, 跑个30-40 min 其实这样的电泳图也可以, 也没有必要追求完美. 你这张图片不是挺好的嘛.
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17楼2014-08-19 17:58:24
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莫伊2013

银虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by beautybanana at 2014-08-19 17:58:24
marker 你点2ul 就可以了, 5ul 的上样量大了. 电压100V左右就可以, 跑个30-40 min 其实这样的电泳图也可以, 也没有必要追求完美. 你这张图片不是挺好的嘛....

昨天又试了下 电压调到90V 跑了45min 情况明显好转 下面是图片
PCR电泳总是跑成狗骨头的样子，求大神帮忙找找原因哦-1
Administrator 2014-08-19 19 时 25 分.jpg
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18楼2014-08-20 09:19:35
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王程程510

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
莫伊2013: 金币+2, ★有帮助 2014-08-20 10:57:20
marker的量不用多，和你跑的DNA的亮度差不多就行，我一般就用2微升，把电压调低，时间延长来跑。另外，选的MARKER要和自己的目的片段长度匹配，100bp长度的如果用2000的marker跑肯定是不合适了，跑出来也不好看。
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19楼2014-08-20 10:55:27
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summerliehu

银虫 (小有名气)
分子量小的话肯定容易弥散，建议你调低电压跑跑试一下
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20楼2014-08-20 17:01:30
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