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莫伊2013

银虫 (小有名气)

[求助] PCR电泳总是跑成狗骨头的样子,求大神帮忙找找原因哦 已有9人参与

PCR电泳参数:电压120V 跑30Min
50XTAE 配制方法:   1. 称量Tris 242g,Na2EDTA·2H2O  37.2g 于1L烧杯中;   2.向烧杯中加入约800ml去离子水,充分搅拌均匀;   3加入57.1ml的冰乙酸,充分溶解;   4.加去离子水定容至1L后,室温保存
50X的TAE稀释成1X的TAE备用
制胶是0.25g琼脂糖 25mL1XTAE 微波溶解8次 凝胶20Min
我跑的电泳图如下,请大家帮忙分析分析

PCR电泳总是跑成狗骨头的样子,求大神帮忙找找原因哦
Administrator 2014-08-18 17 时 18 分.jpg
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beautybanana

木虫 (著名写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 莫伊2013 at 2014-08-19 16:44:25
还是不行啊,是不是我上样量太多了 我点了5微升。怎么搞的啊,配的TAE应该没问题的

Administrator 2014-08-19 16 时 38 分.jpg
...

marker 你点2ul 就可以了, 5ul 的上样量大了. 电压100V左右就可以, 跑个30-40 min 其实这样的电泳图也可以, 也没有必要追求完美. 你这张图片不是挺好的嘛.
17楼2014-08-19 17:58:24
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owl2010

金虫 (正式写手)

不知道你PCR扩增的片段有多大,从图上看应该是引物二聚体,表明引物在模板内没有得到扩增。
男人的组成要素:金钱、面子、性、怕死、自恋、吹牛逼。
2楼2014-08-18 18:19:54
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wangranjun

荣誉版主 (知名作家)

广庭之惘然

优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
莫伊2013(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-19 16:56:22
通常情况下出现这种条带可能是目的片段浓度高上样多,所以可以减少上样试一下。可以提高胶浓度,高浓度的胶跑出来的条带可能会好一些。我同样感觉你的片段是引物二聚体……
他日扬翼九万里,历大千世界,定我红尘心!
3楼2014-08-18 19:17:42
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莫伊2013

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by owl2010 at 2014-08-18 18:19:54
不知道你PCR扩增的片段有多大,从图上看应该是引物二聚体,表明引物在模板内没有得到扩增。

我的引物片段就100多PB 这个是内参基因用来跑QPCR的
我做一下RTPCR给实验做个补充
4楼2014-08-18 19:48:07
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