应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求各位帮忙分析一下PCR电泳图，maker也跑得不好，好伤心……
101/1返回列表
查看: 2441  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

2011210200

金虫 (小有名气)

[求助] 求各位帮忙分析一下PCR电泳图，maker也跑得不好，好伤心……

是土壤总DNA提取后，扩增16srDNA 某片段去做DGGE,PCR后的电泳图如下图，maker是2000bp的，最后条100bp怎么没有？80v，50min跑的跑成这样是啥原因啊？图上最后条应该是250bp，所需片段是250bp左右，好像扩增的效率不是很高啊，有引物二聚体，请各位大牛给点建议嘛，到底是哪里出错了？DNA模板稀释50倍后是300ng/ul左右，PCR体系里就是将模板稀释50倍后加了1ul。

以土壤总DNA为模板扩增16S rDNA序列内的部分片段(200bp左右).JPG



以土壤总DNA为模板扩增16S rDNA序列内的部分片段(200bp左右)2.JPG
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-03-14 21:48:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
2011210200: 金币+5, ★有帮助 2013-03-19 12:18:09
感觉你的胶没有溶好，可能有颗粒，或者是倒胶时候部分凝固了。从MARKER上可以看出来。
而且，可能你的退火温度太高了，感觉目的条带模糊一片。为什么跑胶跑那么长时间呢？我们一般这种叫就100V，12min就差不多了。
赞一下 回复此楼
2楼2013-03-15 15:06:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈彦利

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dshlove at 2013-03-15 15:06:54
感觉你的胶没有溶好，可能有颗粒，或者是倒胶时候部分凝固了。从MARKER上可以看出来。
而且，可能你的退火温度太高了，感觉目的条带模糊一片。为什么跑胶跑那么长时间呢？我们一般这种叫就100V，12min就差不多了。

你好，PCR扩增后出现两条带说明什么问题呀，求指教
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-03-19 21:48:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

当下的距离

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

漏胶了，重新点样，可能有颗粒，或者是倒胶时候部分凝固了。
赞一下(1人) 回复此楼
youcangetwhatyouwantifyouwantitenough.
4楼2013-03-20 00:37:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 陈彦利 at 2013-03-19 21:48:18
你好，PCR扩增后出现两条带说明什么问题呀，求指教...

可能你的退火温度太低了，引物有非特异性结合，P出来非特异性条带了。
赞一下 回复此楼
5楼2013-03-20 09:28:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈彦利

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by dshlove at 2013-03-20 09:28:51
可能你的退火温度太低了，引物有非特异性结合，P出来非特异性条带了。...

明白！谢谢你！
回复此楼
6楼2013-03-20 10:40:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈彦利

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by dshlove at 2013-03-20 09:28:51
可能你的退火温度太低了，引物有非特异性结合，P出来非特异性条带了。...

两条带都跟模版链不一样，也是这个原因吗？
赞一下 回复此楼
7楼2013-03-20 11:25:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 陈彦利 at 2013-03-20 11:25:24
两条带都跟模版链不一样，也是这个原因吗？...

我理解的非特异性条带是会比模板链长度要小的，引物可能在中间部位什么的结合了。而且结合位置不固定，导致P出来的条带不是清晰明亮的，就出现糊成一片的现象。
做一个温度梯度PCR试试。
赞一下 回复此楼
8楼2013-03-20 14:26:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2011210200

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by dshlove at 2013-03-20 14:26:54
我理解的非特异性条带是会比模板链长度要小的，引物可能在中间部位什么的结合了。而且结合位置不固定，导致P出来的条带不是清晰明亮的，就出现糊成一片的现象。
做一个温度梯度PCR试试。...

想问一下这位同学，是否可以通过引物查询自己需要的目标产物是多少bp？我看的那篇文献上并没有说明这种引物的目标产物大概是多少bp。
赞一下 回复此楼
9楼2013-03-20 18:30:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 2011210200 at 2013-03-20 18:30:54
想问一下这位同学，是否可以通过引物查询自己需要的目标产物是多少bp？我看的那篇文献上并没有说明这种引物的目标产物大概是多少bp。...

引物通俗点说就是排头兵，你不可能只看排头兵就知道这队伍到底多长，同样不可以只通过引物查询自己需要的目标产物是多少bp。
赞一下 回复此楼
10楼2013-03-20 19:53:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 2011210200 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +5 生物工程调剂 2026-03-17 9/450 2026-03-21 23:32 by zhujy1982
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 326求调剂 +5 诺贝尔化学奖觊� 2026-03-15 8/400 2026-03-21 19:33 by ColorlessPI
[考研] 材料学学硕080502 337求调剂-一志愿华中科技大学 +4 顺顺顺mr 2026-03-18 5/250 2026-03-21 10:22 by luoyongfeng
[考研] 南昌大学材料专硕311分求调剂 +6 77chaselx 2026-03-20 6/300 2026-03-21 07:24 by JourneyLucky
[考研] 346求调剂[0856] +4 WayneLim327 2026-03-16 7/350 2026-03-21 04:02 by JourneyLucky
[考研] 307求调剂 +3 wyyyqx 2026-03-17 3/150 2026-03-21 03:20 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华中科技大学，080502，354分求调剂 +5 守候夕阳CF 2026-03-18 5/250 2026-03-21 01:06 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华南师大 070300（化学）304分求调剂 +3 0703武芊慧雪304 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:48 by JourneyLucky
[考研] 296求调剂 +6 www_q 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:56 by JourneyLucky
[考研] 274求调剂 +10 S.H1 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:51 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +8 小材化本科 2026-03-18 8/400 2026-03-20 23:16 by JourneyLucky
[考研] 材料学硕297已过四六级求调剂推荐 +11 adaie 2026-03-19 11/550 2026-03-20 21:30 by laoshidan
[考研] 319求调剂 +3 小力气珂珂 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:47 by JourneyLucky
[考研] 本科郑州大学物理学院，一志愿华科070200学硕，346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
[考研] 【同济软件】软件（085405）考研求调剂 +3 2026eternal 2026-03-18 3/150 2026-03-18 19:09 by 搏击518
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
[考研] 334求调剂 +3 志存高远意在机� 2026-03-16 3/150 2026-03-18 08:34 by lm4875102
[考研] 11408 一志愿西电，277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
[考研] 机械专硕325，寻找调剂院校 +3 y9999 2026-03-15 5/250 2026-03-16 19:58 by y9999
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭