24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2507  |  回复: 9

2011210200

金虫 (小有名气)

[求助] 求各位帮忙分析一下PCR电泳图,maker也跑得不好,好伤心……

是土壤总DNA提取后,扩增16srDNA 某片段去做DGGE,PCR后的电泳图如下图,maker是2000bp的,最后条100bp怎么没有?80v,50min跑的跑成这样是啥原因啊?图上最后条应该是250bp,所需片段是250bp左右,好像扩增的效率不是很高啊,有引物二聚体,请各位大牛给点建议嘛,到底是哪里出错了?DNA模板稀释50倍后是300ng/ul左右,PCR体系里就是将模板稀释50倍后加了1ul。

以土壤总DNA为模板扩增16S rDNA序列内的部分片段(200bp左右).JPG



以土壤总DNA为模板扩增16S rDNA序列内的部分片段(200bp左右)2.JPG
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
2011210200: 金币+5, 有帮助 2013-03-19 12:18:09
感觉你的胶没有溶好,可能有颗粒,或者是倒胶时候部分凝固了。从MARKER上可以看出来。
而且,可能你的退火温度太高了,感觉目的条带模糊一片。为什么跑胶跑那么长时间呢?我们一般这种叫就100V,12min就差不多了。
2楼2013-03-15 15:06:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈彦利

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by dshlove at 2013-03-15 15:06:54
感觉你的胶没有溶好,可能有颗粒,或者是倒胶时候部分凝固了。从MARKER上可以看出来。
而且,可能你的退火温度太高了,感觉目的条带模糊一片。为什么跑胶跑那么长时间呢?我们一般这种叫就100V,12min就差不多了。

你好,PCR扩增后出现两条带说明什么问题呀,求指教
3楼2013-03-19 21:48:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

当下的距离

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

漏胶了,重新点样,可能有颗粒,或者是倒胶时候部分凝固了。
youcangetwhatyouwantifyouwantitenough.
4楼2013-03-20 00:37:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 陈彦利 at 2013-03-19 21:48:18
你好,PCR扩增后出现两条带说明什么问题呀,求指教...

可能你的退火温度太低了,引物有非特异性结合,P出来非特异性条带了。
5楼2013-03-20 09:28:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈彦利

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by dshlove at 2013-03-20 09:28:51
可能你的退火温度太低了,引物有非特异性结合,P出来非特异性条带了。...

明白!谢谢你!
6楼2013-03-20 10:40:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈彦利

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by dshlove at 2013-03-20 09:28:51
可能你的退火温度太低了,引物有非特异性结合,P出来非特异性条带了。...

两条带都跟模版链不一样,也是这个原因吗?
7楼2013-03-20 11:25:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 陈彦利 at 2013-03-20 11:25:24
两条带都跟模版链不一样,也是这个原因吗?...

我理解的非特异性条带是会比模板链长度要小的,引物可能在中间部位什么的结合了。而且结合位置不固定,导致P出来的条带不是清晰明亮的,就出现糊成一片的现象。
做一个温度梯度PCR试试。
8楼2013-03-20 14:26:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2011210200

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by dshlove at 2013-03-20 14:26:54
我理解的非特异性条带是会比模板链长度要小的,引物可能在中间部位什么的结合了。而且结合位置不固定,导致P出来的条带不是清晰明亮的,就出现糊成一片的现象。
做一个温度梯度PCR试试。...

想问一下这位同学,是否可以通过引物查询自己需要的目标产物是多少bp?我看的那篇文献上并没有说明这种引物的目标产物大概是多少bp。
9楼2013-03-20 18:30:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 2011210200 at 2013-03-20 18:30:54
想问一下这位同学,是否可以通过引物查询自己需要的目标产物是多少bp?我看的那篇文献上并没有说明这种引物的目标产物大概是多少bp。...

引物通俗点说就是排头兵,你不可能只看排头兵就知道这队伍到底多长,同样不可以只通过引物查询自己需要的目标产物是多少bp。
10楼2013-03-20 19:53:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 2011210200 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 297求调剂 +15 ORCHID1 2026-04-10 16/800 2026-04-12 00:45 by 蓝云思雨
[考研] 求调剂 +18 MAX怅惘 2026-04-09 20/1000 2026-04-11 23:31 by zhen~
[考研] 211本科材料化工求调剂 +13 YHLAH 2026-04-11 14/700 2026-04-11 23:13 by 幸免 ..
[考研] 267求调剂 +8 再忙也要吃饭啊 2026-04-09 8/400 2026-04-11 21:42 by cfdbai
[考研] 086003调剂求助 +21 苏弋万 2026-04-09 22/1100 2026-04-11 20:25 by dongdian1
[考研] 求调剂 +6 电气300求调剂不 2026-04-08 6/300 2026-04-11 20:14 by 逆水乘风
[考研] 269求调剂 +11 啊啊我我 2026-04-07 11/550 2026-04-11 16:45 by vgtyfty
[考研] 288求调剂 +15 代fish 2026-04-09 16/800 2026-04-11 10:26 by wwj2530616
[考研] 一志愿东北大学控制工程085406数二英二385,求调剂 +8 Ezra_Zhang 2026-04-09 8/400 2026-04-11 09:15 by 猪会飞
[考研] 263能源动力专硕求调剂 +3 加大号饭盒袋 2026-04-10 3/150 2026-04-10 22:23 by 286640313
[考研] 本科西工大 324求调剂 +4 wysyjs25 2026-04-10 4/200 2026-04-10 20:00 by 来看流星雨10
[考研] 求调剂 +15 张zic 2026-04-05 16/800 2026-04-10 08:12 by kangsm
[考研] 一志愿 江南大学 085602 化工专硕 338分求调剂 +16 路痴小琪 2026-04-05 16/800 2026-04-10 08:08 by kangsm
[考研] 材料专硕322 +14 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-05 14/700 2026-04-09 13:25 by 5268321
[考研] 308求调剂 +17 墨墨漠 2026-04-06 17/850 2026-04-09 09:25 by 壹往無前
[考研] 一志愿211,化学学硕,310分,本科重点双非,求调剂 +10 努力奋斗112 2026-04-07 10/500 2026-04-08 15:01 by screening
[考研] 319分085702安全工程求调剂 +6 rious 2026-04-05 6/300 2026-04-07 09:42 by jp9609
[考研] 一志愿武汉理工大学080200机械工程308分,求调剂 +4 终不似从前 2026-04-05 4/200 2026-04-06 11:46 by 考研学校招点人
[考研] 302分 085601求调剂推荐 +11 zyx上岸! 2026-04-05 11/550 2026-04-05 22:13 by dongzh2009
[考研] 求调剂到0856材料工程 +3 程9915 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:15 by 蓝云思雨
信息提示
请填处理意见