24小时热门版块排行榜    

查看: 5797  |  回复: 6
【悬赏金币】回答本帖问题,作者070250035将赠送您 19 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

070250035

银虫 (小有名气)

[求助] 反转录后用cDNA做模板扩不出目的基因怎么办???

各位大侠急急求助啊!

       最近小女子做分子实验颇为不顺!扩出来一个1800多的CDS全长,之后提RNA反转录后用CDNA当模板扩增,咋扩都得不到目的片段,程序和之前扩基因组的是一样的,但是之前一直是好好的很漂亮的带,只是LATaq酶扩的时候会出现一条弱的500bp左右片段,现在反转录后可以得到这个非特异的500bp片段,就是没有1800多的,提高退火温度也不行,提高1度后就什么带都没了!折磨死我了!
   
       求神人帮助!万分感谢!
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈:小木虫仅提供交流平台,不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布,如果其内容涉及到知识产权问题,其责任在于用户本人,如对版权有异议,请联系邮箱:libolin3@tal.com
  • 附件 1 : 2012-12-15.bmp
  • 2013-01-15 16:54:41, 1.69 M

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

探究知识的海洋
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

科研屌丝007

新虫 (小有名气)

楼主 你的1800bpCDS序列是从基因组中扩增得到的吧,而你现在以cDNA为模板,那肯定有内含子的影响啊,重新设计引物吧
5楼2013-01-19 22:34:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

yesali

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-01-18 08:08:46
可能这个基因在你提取RNA所用的组织中不表达,查一下这个基因表达最高的那个组织(或者多尝试几个组织),然后提取这个组织中的RNA进行,反转录,作为模板,进行扩增。
再就是buffer建议用GC-rich buffer,
如果这个还不行的话,可以尝试嵌套式PCR
祝你好运!
2楼2013-01-16 08:52:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

070250035

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yesali at 2013-01-16 08:52:31
可能这个基因在你提取RNA所用的组织中不表达,查一下这个基因表达最高的那个组织(或者多尝试几个组织),然后提取这个组织中的RNA进行,反转录,作为模板,进行扩增。
再就是buffer建议用GC-rich buffer,
如果这 ...

在叶片和根都有表达,现在重新反转录,扩出的有接近2000的弱带,切胶回收后再扩却跑出三条很接近的带,都在1500以上,没法判断你哪个是目的序列咋办??而且很近,切的话,区分不开!
探究知识的海洋
3楼2013-01-17 18:44:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

追梦的人1987

金虫 (小有名气)

想问一下,你扩出来的CDS是以DNA为模板还是以RNA为模板啊
4楼2013-01-17 21:08:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
不应助 确定回帖应助 (注意:应助才可能被奖励,但不允许灌水,必须填写15个字符以上)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 75批博士后面上项目公布了 +4 ishow1989 2024-06-28 5/250 2024-06-30 00:58 by ishow1989
[基金申请] 博后面上如何提高创新分? +5 yuyiang 2024-06-29 10/500 2024-06-29 18:24 by yuyiang
[硕博家园] 考博英语 +8 198新用户 2024-06-25 15/750 2024-06-29 15:02 by Lucaswu
[基金申请] 统计一波计分系数 +5 lyfbangong 2024-06-28 6/300 2024-06-29 13:30 by lddscut
[论文投稿] 我在写关于多维空间的论文,希望能与大家交流,准备在science上发表 +10 lgf519 2024-06-24 14/700 2024-06-29 01:16 by f1yfish
[基金申请] 2024年度国家资助博士后研究人员计划(B、C 档)也不知道什么时候出 +11 SCU船船船 2024-06-28 15/750 2024-06-29 00:21 by 666中
[找工作] offer选择 +13 羡渔樵 2024-06-26 13/650 2024-06-28 23:59 by 高敖曹
[药学] 大佬们来讨论下,为什么分子里加入了有毒性的官能团分子反而没毒了 +4 HF111001 2024-06-24 5/250 2024-06-28 22:45 by 渣男2019
[基金申请] 博后网上办公系统维护 +14 取名字烦人 2024-06-25 23/1150 2024-06-28 17:22 by cincpac
[基金申请] 第75批博后面上 “应该是这两周”基金管理处的电话终于通了 +8 makele123 2024-06-27 11/550 2024-06-28 16:32 by since—2010
[基金申请] 专科院校申请国自然 +18 孤单12站 2024-06-24 33/1650 2024-06-28 12:26 by sunjc
[考博] 论文被硕导卡 +6 自强不息a?a 2024-06-26 9/450 2024-06-27 21:37 by chemhua
[基金申请] 基金评审时,评审专家还回去看申请人代表作之外的文章吗? +12 孤单12站 2024-06-26 18/900 2024-06-27 18:30 by 孤单12站
[基金申请] 75批面上出结果了么?系统卡的进不去了 +4 wziguang33 2024-06-27 4/200 2024-06-27 15:53 by xter9665
[有机交流] 脱酯基合成步骤 5+4 小辉灰@anhui 2024-06-25 8/400 2024-06-27 11:17 by 火龙骑士
[有机交流] 大佬们,打的核磁氢谱与chemdraw预测的有偏差 +7 来了个 2024-06-26 7/350 2024-06-27 11:11 by wubiansiya
[考博] 申博好难 +6 自强不息a?a 2024-06-24 6/300 2024-06-25 23:02 by 考研吒儿
[基金申请] 这样的说辞是上会了吗 +12 学员d3zYCz 2024-06-24 15/750 2024-06-25 22:05 by 3115321
[基金申请] 博后面上到底什么时候出结果??? +7 爱学lsy 2024-06-24 7/350 2024-06-25 19:24 by 暴走的蒜泥
[有机交流] 对苯乙烯磺酰氯的合成机理 10+3 该死的科研 2024-06-24 5/250 2024-06-25 17:30 by 王学士
信息提示
请填处理意见