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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » qPC目的基因的长度问题
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zhang2772

银虫 (初入文坛)

[求助] qPC目的基因的长度问题

最近在做qPCR，根据文献合成引物\\\\\\\\\\\\\\\'，而且根据所给的条件进行普通PCR，但是最后发现目的基因长度在600bp左右，理论长度为470bp，做了还几次都这样，这是什么原因呀，还有qPCR目的基因长度有没有要求，在什么范围比较好。请各位赐教

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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自己选的路，自已独自走下去
1楼 2013-04-13 06:45:31
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gyesang

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-04-13 21:00:59
qPCR产物 长度最好控制在80-150bp，这样可以缩短扩增时间，如果引物跨内含子设计，可以规避基因组DNA的污染，

“但是最后发现目的基因长度在600bp左右，理论长度为470bp”，你扩出600bp的序列，是不是基因组序列呢？
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-04-13 15:59:05
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zhang2772

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-04-13 15:59:05
qPCR产物 长度最好控制在80-150bp，这样可以缩短扩增时间，如果引物跨内含子设计，可以规避基因组DNA的污染，

“但是最后发现目的基因长度在600bp左右，理论长度为470bp”，你扩出600bp的序列，是不是基因组序列 ...

我的基因组全序列有1200bp呢，应该不是的。那我这段600bp的片段有必要进行克隆测序么，是不是非特异性扩增呀，谢谢答复。
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自己选的路，自已独自走下去
3楼2013-04-13 20:34:00
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zhang2772

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-04-13 15:59:05
qPCR产物 长度最好控制在80-150bp，这样可以缩短扩增时间，如果引物跨内含子设计，可以规避基因组DNA的污染，

“但是最后发现目的基因长度在600bp左右，理论长度为470bp”，你扩出600bp的序列，是不是基因组序列 ...

我是直接进行DNA的PCR，没有使用RNA反转录这步骤的，应该和“基因组序列”没关系吧。
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自己选的路，自已独自走下去
4楼2013-04-13 20:40:23
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gyesang

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【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by zhang2772 at 2013-04-13 20:40:23
我是直接进行DNA的PCR，没有使用RNA反转录这步骤的，应该和“基因组序列”没关系吧。...

没有使用RNA反转录这步骤,那跟基因组没有关系，但扩400多bp还是太长了，可以考虑换引物
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2013-04-14 00:54:40
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