| 查看: 2219 | 回复: 5 | ||
zcz772170623铜虫 (小有名气)
|
[求助]
提取细菌基因组DNA时出现问题，求帮助 已有1人参与
|
|
这是我的提取方法 1、收集培养好的细菌菌体2mL。12000rpm，1min，弃上清液。 2、加入200uL溶液I，涡旋振荡混匀。 3、加入200uL 2X的细菌裂解液，颠倒混匀，室温反应30min，中间反复颠倒混匀数次。 4、加入200uL 5M的氯化钠混匀，颠倒混匀，12000rpm，15~20min，取上清。 5、加入1/5体积的CTAB/NaCl，颠倒混匀，混匀65℃（金属浴），30min。 6、12000rpm，15~20min，取上清。 7、向上清液中加入0.5mL浓度为10mg/mL的RnaseA，37℃，30min。（可不做） 8、加入等体积的酚/氯仿（1:1）（异戊醇是为了消沫，可不用），12000rpm，15min。取上清液重复至无中间层。 9、加入等体积的氯仿，12000rpm，15min。 10、取上清液加入0.6倍体积冰预冷的异丙醇沉淀过夜（-20℃），4℃，12000rpm，15min。 11、冰预冷的70%乙醇洗两次，无水乙醇洗一次。 12、干燥后用适量TE溶解。 溶液I：等同于提取质粒所用的溶液I 50mM 葡萄糖、25mM Tris-Cl（pH8.0）、10mM EDTA（pH8.0）、高压灭菌 1X裂解液： 40mM Tris-醋酸，20mM 醋酸钠（pH7.8），1mMEDTA，1%SDS 配制100mL裂解液：1M Tris-醋酸4mL，0.5M EDTA 200uL，3M 醋酸钠（pH7.8） 667uL，SDS 1g 配制2X的将各试剂加大一倍。 CTAB/NaCl： 5% CTAB；1.4M NaCl；50mM Tris-cL 在到了第2步的时候，出现的白色沉淀怎么都离心不下来，飘在上清液里，吸了些上清液之后，在第3步离心的时候就根本没有上清液了，是白色的果冻一样，不知道是怎么回事。 |
回复此楼» 猜你喜欢
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有222人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
-
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核
已经有0人回复
-
logP 6.1 的羧酸怎么配母液：GSK 650394 的溶解窗口与稀释顺序
已经有0人回复
-
从"水不溶"到 71 mg/mL：雷特格韦的 pH 依赖溶解与螯合色谱边界
已经有0人回复
-
133 Ų 的极性表面积，如何决定 TNG462 的母液配制与色谱条件
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 请问提取细菌基因组DNA需要去除RNA吗
已经有11人回复
- 提取细菌基因组DNA
已经有11人回复
- 为什么细菌基因组提取出来总是23K？
已经有8人回复
- 提取基因组DNA发生一件很奇怪的事情
已经有21人回复
- 细菌基因组提取
已经有4人回复
- 细菌基因组DNA抽提 用异丙醇沉淀很多
已经有5人回复
- 有没有人做过细菌全基因组测序DNA提取的？
已经有5人回复
- 水体细菌基因组总DNA的提取
已经有6人回复
- 我为什么最近提取真菌的基因组DNA总是提取不出
已经有10人回复
- 提取细菌基因组DNA时总是会有蛋白残留
已经有10人回复
- 总是提不出来细菌基因组DNA
已经有11人回复
- 提取细菌基因组DNA
已经有9人回复
- 基因组DNA提取结果
已经有17人回复
- 用CTAB法提取细菌基因组DNA时，为何离心效果不好
已经有4人回复
- 细菌基因组DNA的提取问题
已经有17人回复
- 细菌基因组DNA提取 交流
已经有18人回复
- 基因组DNA提取问题
已经有32人回复
- 细菌全基因组提取求助
已经有7人回复
- 细菌基因组DNA的纯化方法？
已经有5人回复
- 【求助/交流】关于提取基因组DNA过程中遇到的难题
已经有10人回复
- 【求助/交流】关于细菌基因组DNA提取的问题？
已经有5人回复
- 【求助/交流】提取细菌基因组DNA的试剂盒
已经有8人回复
- 【求助/交流】细菌基因组DNA的提取法（CTAB/NaCl 法）,提取的DNA是否为细菌总DNA? 非�
已经有11人回复
- 【求助/交流】关于细菌基因组DNA大小的问题
已经有9人回复
2楼2014-07-09 11:51:14
zcz772170623
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 48
- 散金: 50
- 红花: 1
- 帖子: 97
- 在线: 50.9小时
- 虫号: 1428463
- 注册: 2011-10-05
- 性别: GG
- 专业: 生物信息学
3楼2014-07-09 14:40:31
4楼2014-07-09 17:13:39
5楼2014-07-09 17:26:57
laojiu9878
至尊木虫 (文坛精英)
九牛
- 应助: 60 (初中生)
- 金币: 32797.4
- 红花: 3
- 帖子: 10434
- 在线: 237小时
- 虫号: 617287
- 注册: 2008-10-05
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
6楼2014-07-10 10:38:11
