| 查看: 1515 | 回复: 5 | ||
tmoonday金虫 (小有名气)
|
[求助]
细菌基因组DNA抽提 用异丙醇沉淀很多
|
|
小虫最近抽细菌总DNA遇到问题了，望各位大神指导 1用经典的酚氯仿异戊醇抽提DNA，酚氯仿异戊醇25：24:1混合两次，第二次中间没有太多蛋白，后氯仿异戊醇再混合一次，吸上清加0.6-0.7的异丙醇沉淀（-20℃），12000rpm离心10min发现有很多沉淀，70%乙醇洗涤后，沉淀不变，烘干后成白色，加dd水不容易溶，需要放到37℃放置一段时间才能溶。 2用NANODROP 测DNA浓度时，A260/A230在1.0-1.2左右，最高峰不是在260nm，靠近230，A260/A280在1.8-2.1左右 3跑琼脂糖胶的时候胶孔处有残留，抽出来的DNA不能被酶切（Bam I，EcoR I,Hind III,都试过酶切了12h以上） 请问这是出了什么问题，最近抽了好多次都是这个状况，实验室其他人员也是这个情况，偶尔也有抽的较好的，如图二。 最近快疯了，因为要建基因组文库，试剂盒抽的太淡了。跪求大神指导！！！！  图一异常的DNA.jpg  图二（前面是抽i的有问题的DNA，后面是正常的DNA）.jpg  图三BamI,EcoRI,Hind III酶切.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
寻求一种能扛住强氧化性腐蚀性的容器密封件
已经有7人回复
-
到新单位后，换了新的研究方向，没有团队，持续积累2区以上论文，能申请到面上吗
已经有8人回复
-
申请2026年博士
已经有6人回复
-
请问哪里可以有青B申请的本子可以借鉴一下。
已经有5人回复
-
天津工业大学郑柳春团队欢迎化学化工、高分子化学或有机合成方向的博士生和硕士生加入
已经有5人回复
-
2025冷门绝学什么时候出结果
已经有7人回复
-
请问有评职称，把科研教学业绩算分排序的高校吗
已经有6人回复
-
Bioresource Technology期刊，第一次返修的时候被退回好几次了
已经有7人回复
-
请问下大家为什么这个铃木偶联几乎不反应呢
已经有5人回复
-
康复大学泰山学者周祺惠团队招收博士研究生
已经有6人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
猪粪中细菌总DNA的提取
已经有15人回复- 提DNA时在异丙醇中加入氯仿异戊醇会有什么影响？
已经有6人回复
- 油菜DNA提取问题，用的CTAB法提取，要求质量高点
已经有3人回复
- 有关基因组提取问题
已经有19人回复
- 小片段基因文库构建中载体的选择
已经有15人回复
- 大家来说说做southern blot时，基因组DNA的提取方法
已经有39人回复
- 手提基因组方法遇到的问题
已经有12人回复
- 在用CTAB法提取曲霉总DNA时，提取很多次没有成功，期望大家多多帮助。
已经有16人回复
- 提取一株芽孢杆菌DNA，可是什么也没得到
已经有13人回复
- 全血基因组的提取问题
已经有6人回复
- CTAB 基因提取方法的问题
已经有10人回复
- 丝状真菌提取总DNA问题
已经有14人回复
- 【求助/交流】提基因组DNA，加了异丙醇没有DNA析出~~~
已经有13人回复
- 【求助/交流】异丙醇沉淀DNA
已经有24人回复
- 【求助/交流】乙醇沉淀法纯化cDNA
已经有4人回复
- 【求助/交流】请教基因组的纯化方法。
已经有5人回复
- 【求助/交流】细菌基因组DNA的提取法（CTAB/NaCl 法）,提取的DNA是否为细菌总DNA? 非�
已经有11人回复
yang0071
木虫 (职业作家)
- BioEPI: 2
- 应助: 207 (大学生)
- 金币: 1573.4
- 散金: 9319
- 红花: 21
- 帖子: 4041
- 在线: 647.7小时
- 虫号: 50941
- 注册: 2004-07-15
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
2楼2013-12-10 13:49:42
tmoonday
金虫 (小有名气)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 2999.9
- 散金: 10
- 红花: 2
- 帖子: 290
- 在线: 323小时
- 虫号: 1703018
- 注册: 2012-03-19
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
3楼2013-12-10 16:17:32
梧桐柒夕
主管区长 (文坛精英)
- 应助: 65 (初中生)
- 贵宾: 22.48
- 金币: 16761.6
- 散金: 53048
- 红花: 268
- 沙发: 69
- 帖子: 16442
- 在线: 1046.8小时
- 虫号: 2776634
- 注册: 2013-11-04
- 专业: 人格心理学
- 管辖: 资源共享区
4楼2013-12-10 16:52:08
tmoonday
金虫 (小有名气)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 2999.9
- 散金: 10
- 红花: 2
- 帖子: 290
- 在线: 323小时
- 虫号: 1703018
- 注册: 2012-03-19
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
5楼2013-12-10 17:17:48
梧桐柒夕
主管区长 (文坛精英)
- 应助: 65 (初中生)
- 贵宾: 22.48
- 金币: 16761.6
- 散金: 53048
- 红花: 268
- 沙发: 69
- 帖子: 16442
- 在线: 1046.8小时
- 虫号: 2776634
- 注册: 2013-11-04
- 专业: 人格心理学
- 管辖: 资源共享区
6楼2013-12-10 19:07:06