应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】提基因组DNA，加了异丙醇没有DNA析出~~~
141/2返回列表12下一页
查看: 2948  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

xiaoee2728

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】提基因组DNA，加了异丙醇没有DNA析出~~~ 已有9人参与

提基因组DNA，加了异丙醇-20度放置15min后离心，能看到明显的沉淀，再加入70%乙醇洗涤后发现沉淀溶解（可能是该试剂放置时间过长，乙醇已经挥发），然后加入等体积的异丙醇重新沉淀，离心后没有沉淀。
    然后听从了师兄的建议，又加了2.5倍体积的无水乙醇和十分之一体积的3M的醋酸钠，-20度放置15分钟后离心，仍未见沉淀，请问还有没有方法将DNA提取出来了，现在的总体积已经有7ml了。
     这个实验前期处理细胞很费时间，实在不想重新做了，希望各位牛人帮帮忙啊！
    万分感激~~~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
似水流年
1楼 2011-03-03 10:47:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nininini

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看不到沉淀未必没有吧~~可以先电泳看看结果啊
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-03-03 10:49:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

starseacow

专家顾问 (职业作家)
凶多吉少了，估计得重提了
赞一下 回复此楼
植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
3楼2011-03-03 10:50:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-03 11:09:32
如果乙醇洗这一步，里头含了不少的水，那么DNA就溶解掉了……
太大体积的东西，醇很难沉淀下东西了，因为实在很稀
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-03-03 10:58:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

holyala

木虫 (著名写手)

砖家
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-03 11:09:43
提DNA的体积到7mL了？样品估计有多少细胞？预期的DNA产量是多少？如果不是大量提取的话，体积太大肯定会影响提取效果的。而且...这么大个管子，就算有一点沉淀，你也未必看得见。不如像2楼说的，跑个电泳看看结果。不过离心后的上清先移到另一个管子里留着，以防万一嘛

[ Last edited by holyala on 2011-3-3 at 11:11 ]
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2011-03-03 11:08:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoee2728

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by holyala at 2011-03-03 11:08:23:
提DNA的体积到7mL了？样品估计有多少细胞？预期的DNA产量是多少？如果不是大量提取的话，体积太大肯定会影响提取效果的。而且...这么大个管子，就算有一点沉淀，你也未必看得见。不如像2楼说的，跑个电泳看看结果 ...

细胞是很多，一大瓶，目的是做DNA ladder，看来只能先这么做试试看了，不行的话也只能重做了，
赞一下 回复此楼
似水流年
6楼2011-03-03 11:29:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoee2728

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-03-03 10:58:36:
如果乙醇洗这一步，里头含了不少的水，那么DNA就溶解掉了……
太大体积的东西，醇很难沉淀下东西了，因为实在很稀

确实是，做之前没有考虑到这一点，加了以后发现沉淀越来越少，后来就看不到了，早知如此不如不用乙醇洗了，哎，早晚都会发现的。
   重做就重做吧，算是个教训了~~~
赞一下 回复此楼
似水流年
7楼2011-03-03 11:31:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuruoyuxue

木虫 (正式写手)

~！@#￥%&…&%￥#@！~
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-03-03 20:54:44
我用的是蛋白酶K的方法提取的，希望对你有帮助。在你说的第一步之后（-20度15min）底下的沉淀不是DNA而是多糖，蛋白质什么的杂质，而飘在沉淀上边的是DNA，不过是粉末状的，再往上就是丝状的DNA了。一般情况下，丝状的不需要冷藏就可以出来，而粉末状的我一般要放到冰箱里面析出一下。
赞一下(2人) 回复此楼
要努力活着，因为我们会死很久很久的！
8楼2011-03-03 12:51:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoee2728

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yuruoyuxue at 2011-03-03 12:51:31:
我用的是蛋白酶K的方法提取的，希望对你有帮助。在你说的第一步之后（-20度15min）底下的沉淀不是DNA而是多糖，蛋白质什么的杂质，而飘在沉淀上边的是DNA，不过是粉末状的，再往上就是丝状的DNA了。一般情况下，丝 ...

重新离心了一下，发现有沉淀，看来是析出的时间太短了。又放了一上午，现在已经在电泳了，希望能做出来~~
感谢大家的帮忙啊！
赞一下 回复此楼
似水流年
9楼2011-03-03 17:33:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
知道难 一开始还用陈年的试剂 不新配？

   错在起步上。
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2011-03-03 19:56:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiaoee2728 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 博士自荐 +7 科研狗111 2026-02-26 11/550 2026-03-01 22:24 by 哲平L
[考研] 材料学硕318求调剂 +3 February_Feb 2026-03-01 3/150 2026-03-01 22:21 by gaoxiaoniuma
[基金申请] 成果系统访问量大，请一小时后再尝试。---NSFC啥时候好哦，已经两天这样了 +3 NSFC2026我来了 2026-02-28 3/150 2026-03-01 21:41 by autumntian
[考研] 一志愿郑大材料学硕298分，求调剂 +3 wsl111 2026-03-01 3/150 2026-03-01 21:38 by ms629
[考研] 299求调剂 +3 Y墨明棋妙Y 2026-02-28 5/250 2026-03-01 21:01 by tangxiaotian
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 12/600 2026-03-01 19:48 by 好好好1233
[考研] 306分材料调剂 +4 chuanzhu川烛 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:48 by 无际的草原
[考研] 0856化工专硕求调剂 +12 董boxing 2026-03-01 12/600 2026-03-01 19:45 by 材子momo
[考研] 291分工科求调剂 +9 science饿饿 2026-03-01 10/500 2026-03-01 18:55 by 18137688336
[考研] 281求调剂 +4 2026计算机_诚心 2026-03-01 7/350 2026-03-01 17:20 by 2026计算机_诚心
[考研] 285求调剂 +8 满头大汗的学生 2026-02-28 8/400 2026-03-01 16:47 by caszguilin
[基金申请] 刚录用，没有期刊号，但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
[考研] 311求调剂 +6 亭亭亭01 2026-03-01 6/300 2026-03-01 15:41 by 324616
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[考研] 寻找调剂 +4 LYidhsjabdj 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:56 by sunny81
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧？ +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭