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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】提基因组DNA，加了异丙醇没有DNA析出~~~
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xiaoee2728

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】提基因组DNA，加了异丙醇没有DNA析出~~~ 已有9人参与

提基因组DNA，加了异丙醇-20度放置15min后离心，能看到明显的沉淀，再加入70%乙醇洗涤后发现沉淀溶解（可能是该试剂放置时间过长，乙醇已经挥发），然后加入等体积的异丙醇重新沉淀，离心后没有沉淀。
    然后听从了师兄的建议，又加了2.5倍体积的无水乙醇和十分之一体积的3M的醋酸钠，-20度放置15分钟后离心，仍未见沉淀，请问还有没有方法将DNA提取出来了，现在的总体积已经有7ml了。
     这个实验前期处理细胞很费时间，实在不想重新做了，希望各位牛人帮帮忙啊！
    万分感激~~~
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似水流年
1楼 2011-03-03 10:47:00
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nininini

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看不到沉淀未必没有吧~~可以先电泳看看结果啊
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2楼2011-03-03 10:49:26
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
凶多吉少了，估计得重提了
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
3楼2011-03-03 10:50:28
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-03 11:09:32
如果乙醇洗这一步，里头含了不少的水，那么DNA就溶解掉了……
太大体积的东西，醇很难沉淀下东西了，因为实在很稀
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4楼2011-03-03 10:58:36
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-03 11:09:43
提DNA的体积到7mL了？样品估计有多少细胞？预期的DNA产量是多少？如果不是大量提取的话，体积太大肯定会影响提取效果的。而且...这么大个管子，就算有一点沉淀，你也未必看得见。不如像2楼说的，跑个电泳看看结果。不过离心后的上清先移到另一个管子里留着，以防万一嘛

[ Last edited by holyala on 2011-3-3 at 11:11 ]
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5楼2011-03-03 11:08:23
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xiaoee2728

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by holyala at 2011-03-03 11:08:23:
提DNA的体积到7mL了？样品估计有多少细胞？预期的DNA产量是多少？如果不是大量提取的话，体积太大肯定会影响提取效果的。而且...这么大个管子，就算有一点沉淀，你也未必看得见。不如像2楼说的，跑个电泳看看结果 ...

细胞是很多，一大瓶，目的是做DNA ladder，看来只能先这么做试试看了，不行的话也只能重做了，
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似水流年
6楼2011-03-03 11:29:06
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xiaoee2728

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-03-03 10:58:36:
如果乙醇洗这一步，里头含了不少的水，那么DNA就溶解掉了……
太大体积的东西，醇很难沉淀下东西了，因为实在很稀

确实是，做之前没有考虑到这一点，加了以后发现沉淀越来越少，后来就看不到了，早知如此不如不用乙醇洗了，哎，早晚都会发现的。
   重做就重做吧，算是个教训了~~~
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似水流年
7楼2011-03-03 11:31:37
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yuruoyuxue

木虫 (正式写手)

~！@#￥%&…&%￥#@！~
★ ★ ★
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amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-03-03 20:54:44
我用的是蛋白酶K的方法提取的，希望对你有帮助。在你说的第一步之后（-20度15min）底下的沉淀不是DNA而是多糖，蛋白质什么的杂质，而飘在沉淀上边的是DNA，不过是粉末状的，再往上就是丝状的DNA了。一般情况下，丝状的不需要冷藏就可以出来，而粉末状的我一般要放到冰箱里面析出一下。
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要努力活着，因为我们会死很久很久的！
8楼2011-03-03 12:51:31
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xiaoee2728

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yuruoyuxue at 2011-03-03 12:51:31:
我用的是蛋白酶K的方法提取的，希望对你有帮助。在你说的第一步之后（-20度15min）底下的沉淀不是DNA而是多糖，蛋白质什么的杂质，而飘在沉淀上边的是DNA，不过是粉末状的，再往上就是丝状的DNA了。一般情况下，丝 ...

重新离心了一下，发现有沉淀，看来是析出的时间太短了。又放了一上午，现在已经在电泳了，希望能做出来~~
感谢大家的帮忙啊！
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似水流年
9楼2011-03-03 17:33:12
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yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
知道难 一开始还用陈年的试剂 不新配？

   错在起步上。
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10楼2011-03-03 19:56:38
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