应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】提基因组DNA，加了异丙醇没有DNA析出~~~
141/2返回列表12下一页
查看: 2974  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

xiaoee2728

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】提基因组DNA，加了异丙醇没有DNA析出~~~ 已有9人参与

提基因组DNA，加了异丙醇-20度放置15min后离心，能看到明显的沉淀，再加入70%乙醇洗涤后发现沉淀溶解（可能是该试剂放置时间过长，乙醇已经挥发），然后加入等体积的异丙醇重新沉淀，离心后没有沉淀。
    然后听从了师兄的建议，又加了2.5倍体积的无水乙醇和十分之一体积的3M的醋酸钠，-20度放置15分钟后离心，仍未见沉淀，请问还有没有方法将DNA提取出来了，现在的总体积已经有7ml了。
     这个实验前期处理细胞很费时间，实在不想重新做了，希望各位牛人帮帮忙啊！
    万分感激~~~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
似水流年
1楼 2011-03-03 10:47:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nininini

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看不到沉淀未必没有吧~~可以先电泳看看结果啊
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-03-03 10:49:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

starseacow

专家顾问 (职业作家)
凶多吉少了，估计得重提了
赞一下 回复此楼
植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
3楼2011-03-03 10:50:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-03 11:09:32
如果乙醇洗这一步，里头含了不少的水，那么DNA就溶解掉了……
太大体积的东西，醇很难沉淀下东西了，因为实在很稀
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-03-03 10:58:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

holyala

木虫 (著名写手)

砖家
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-03 11:09:43
提DNA的体积到7mL了？样品估计有多少细胞？预期的DNA产量是多少？如果不是大量提取的话，体积太大肯定会影响提取效果的。而且...这么大个管子，就算有一点沉淀，你也未必看得见。不如像2楼说的，跑个电泳看看结果。不过离心后的上清先移到另一个管子里留着，以防万一嘛

[ Last edited by holyala on 2011-3-3 at 11:11 ]
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2011-03-03 11:08:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoee2728

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by holyala at 2011-03-03 11:08:23:
提DNA的体积到7mL了？样品估计有多少细胞？预期的DNA产量是多少？如果不是大量提取的话，体积太大肯定会影响提取效果的。而且...这么大个管子，就算有一点沉淀，你也未必看得见。不如像2楼说的，跑个电泳看看结果 ...

细胞是很多，一大瓶，目的是做DNA ladder，看来只能先这么做试试看了，不行的话也只能重做了，
赞一下 回复此楼
似水流年
6楼2011-03-03 11:29:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoee2728

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-03-03 10:58:36:
如果乙醇洗这一步，里头含了不少的水，那么DNA就溶解掉了……
太大体积的东西，醇很难沉淀下东西了，因为实在很稀

确实是，做之前没有考虑到这一点，加了以后发现沉淀越来越少，后来就看不到了，早知如此不如不用乙醇洗了，哎，早晚都会发现的。
   重做就重做吧，算是个教训了~~~
赞一下 回复此楼
似水流年
7楼2011-03-03 11:31:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuruoyuxue

木虫 (正式写手)

~！@#￥%&…&%￥#@！~
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-03-03 20:54:44
我用的是蛋白酶K的方法提取的，希望对你有帮助。在你说的第一步之后（-20度15min）底下的沉淀不是DNA而是多糖，蛋白质什么的杂质，而飘在沉淀上边的是DNA，不过是粉末状的，再往上就是丝状的DNA了。一般情况下，丝状的不需要冷藏就可以出来，而粉末状的我一般要放到冰箱里面析出一下。
赞一下(2人) 回复此楼
要努力活着，因为我们会死很久很久的！
8楼2011-03-03 12:51:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoee2728

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yuruoyuxue at 2011-03-03 12:51:31:
我用的是蛋白酶K的方法提取的，希望对你有帮助。在你说的第一步之后（-20度15min）底下的沉淀不是DNA而是多糖，蛋白质什么的杂质，而飘在沉淀上边的是DNA，不过是粉末状的，再往上就是丝状的DNA了。一般情况下，丝 ...

重新离心了一下，发现有沉淀，看来是析出的时间太短了。又放了一上午，现在已经在电泳了，希望能做出来~~
感谢大家的帮忙啊！
赞一下 回复此楼
似水流年
9楼2011-03-03 17:33:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
知道难 一开始还用陈年的试剂 不新配？

   错在起步上。
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2011-03-03 19:56:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiaoee2728 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 286求调剂 +10 Faune 2026-03-21 10/500 2026-03-21 23:34 by 314126402
[考研] 考研化学学硕调剂，一志愿985 +5 张vvvv 2026-03-15 7/350 2026-03-21 19:23 by ColorlessPI
[考研] 311求调剂 +3 勇敢的小吴 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:40 by ColorlessPI
[考研] 296求调剂 +4 www_q 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:26 by 学员8dgXkO
[考研] 生物学一志愿985，分数349求调剂 +3 zxts12 2026-03-21 3/150 2026-03-21 16:34 by 33来了真来了
[考研] 306求调剂 +4 chuanzhu川烛 2026-03-18 4/200 2026-03-21 08:25 by laoshidan
[考研] 346求调剂[0856] +4 WayneLim327 2026-03-16 7/350 2026-03-21 04:02 by JourneyLucky
[考研] 083200学硕321分一志愿暨南大学求调剂 +3 innocenceF 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:35 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +6 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 7/350 2026-03-21 01:03 by JourneyLucky
[考研] 321求调剂 +9 何润采123 2026-03-18 11/550 2026-03-20 23:19 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:15 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南理工085701环境302求调剂院校 +3 葵梓卫队 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:28 by zhukairuo
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +7 困于星晨 2026-03-17 9/450 2026-03-20 17:38 by 无懈可击111
[考研] 281求调剂（0805） +14 烟汐忆海 2026-03-16 25/1250 2026-03-20 15:47 by yuncha
[考研] 求调剂 +3 暗涌afhb 2026-03-16 3/150 2026-03-20 00:28 by 河南大学校友
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +10 慕寒mio 2026-03-16 10/500 2026-03-19 15:26 by 丁丁*
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:12 by ruiyingmiao
[考研] 材料工程专硕274一志愿211求调剂 +6 薛云鹏 2026-03-15 6/300 2026-03-17 11:05 by 学员h26Tkc
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭