应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于基因组纯化的问题：异丙醇法
71/1返回列表
查看: 1188  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

adslye

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】关于基因组纯化的问题：异丙醇法 已有3人参与

英文原文：
1.   Adjust  the  salt  concentration  if  necessary,  for  example,  with  sodium  acetate  (0.3  M,  pH  5.2,  final
concentration) or ammonium acetate (2.0–2.5 M, final concentration).
2.   Add 0.6–0.7 volumes of room-temperature isopropanol to the DNA solution and mix well.
这两步我的操作是：
在0.3  M,  pH  5.2的醋酸钠中加入20ul我的基因组DNA。然后再加入700ul的异丙醇。
然而之后的4'c ，20min离心并没有沉淀。

我想问是不是我理解错了，那个0.3M是包括异丙醇的。

还有基因组纯化用：苯酚，氯仿依次萃取再用醇提的。

请问对于基因组的纯化，两种方法哪种合适？

谢谢！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-08-07 20:49:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

adslye

银虫 (正式写手)
帮个忙。。。。各位。。。。
回复此楼
2楼2010-08-07 21:07:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lmzxcom1(金币+1):谢谢积极交流 2010-08-07 22:23:46
一般是这么操作的
配制3M NaAc（pH 5.2）
向DNA溶液中加入1/10体积的上述NaAc溶液（比如100uLDNA，就加10uL，这样终浓度就近似是0.3M）
然后加入70uL室温异丙醇（0.7倍体积）混匀，静置沉淀

一般来说，如果样品里有蛋白杂质，就要用酚/氯仿，氯仿依次抽提之后再用醇沉淀
醇沉淀的时候可以加入NaAc，低温静置，有利于核酸沉淀
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-08-07 21:31:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

adslye

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-08-07 21:31:59:
一般是这么操作的
配制3M NaAc（pH 5.2）
向DNA溶液中加入1/10体积的上述NaAc溶液（比如100uLDNA，就加10uL，这样终浓度就近似是0.3M）
然后加入70uL室温异丙醇（0.7倍体积）混匀，静置沉淀

一般来说，如果 ...

那异丙醇法除蛋白效果好不？
赞一下 回复此楼
4楼2010-08-07 22:14:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
异丙醇是有机溶剂，但不是所有有机溶剂都能使蛋白质变性，在我的实验里，异丙醇沉淀后的蛋白质会有40-50%能重新溶解在水里。

这两句话说的是保持溶液里.3  M,  pH  5.2,  final concentration，是最终浓度和pH值。然后加入溶液体积 0.6–0.7 volumes 倍的异丙醇，比如溶液体积是1毫升，异丙醇就加进去600-700微升，总体积大概1.6-1.7毫升。
赞一下 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2010-08-08 03:21:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ben1147

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by adslye at 2010-08-07 22:14:03:


那异丙醇法除蛋白效果好不？

醇在这里的作用主要是沉淀核酸

要除蛋白还是推荐酚/氯仿，氯仿抽提
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-08-08 10:56:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

adslye

银虫 (正式写手)
哦，知道了，多谢！
回复此楼
7楼2010-08-08 11:04:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 adslye 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 生物学调剂招人！！！ +3 山海天岚 2026-03-17 4/200 2026-03-19 21:34 by 怎么释怀
[考研] 321求调剂 +8 何润采123 2026-03-18 10/500 2026-03-19 16:46 by 何润采123
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +8 zlingli 2026-03-13 8/400 2026-03-19 16:32 by 轻松不少随
[考研] 材料与化工求调剂 +7 为学666 2026-03-16 7/350 2026-03-19 14:48 by 尽舜尧1
[考研] 一志愿南昌大学，327分，材料与化工085600 +3 Ncdx123456 2026-03-19 3/150 2026-03-19 13:18 by houyaoxu
[考研] 本科郑州大学物理学院，一志愿华科070200学硕，346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +7 步川酷紫123 2026-03-13 7/350 2026-03-18 17:12 by 尽舜尧1
[考研] 085601专硕，总分342求调剂，地区不限 +5 share_joy 2026-03-16 5/250 2026-03-18 14:48 by haxia
[考研] 298-一志愿中国农业大学-求调剂 +7 手机用户 2026-03-17 7/350 2026-03-18 14:34 by vgtyfty
[考研] 331求调剂（0703有机化学 +7 ZY-05 2026-03-13 8/400 2026-03-18 14:13 by 007_lilei
[考博] 环境领域全国重点实验室招收博士1-2名 +3 QGZDSYS 2026-03-13 5/250 2026-03-18 11:13 by QGZDSYS
[考研] 265求调剂 +3 梁梁校校 2026-03-17 3/150 2026-03-18 09:12 by zhukairuo
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨； 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
[考研] 277材料科学与工程080500求调剂 +3 自由煎饼果子 2026-03-16 3/150 2026-03-16 14:10 by 运气yunqi
[考研] 304求调剂 +7 7712b 2026-03-13 7/350 2026-03-13 21:42 by peike
[考研] 290求调剂 +3 ADT 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:19 by peike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭