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adslye

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】关于基因组纯化的问题:异丙醇法 已有3人参与

英文原文:
1.   Adjust  the  salt  concentration  if  necessary,  for  example,  with  sodium  acetate  (0.3  M,  pH  5.2,  final
concentration) or ammonium acetate (2.0–2.5 M, final concentration).
2.   Add 0.6–0.7 volumes of room-temperature isopropanol to the DNA solution and mix well.
这两步我的操作是:
在0.3  M,  pH  5.2的醋酸钠中加入20ul我的基因组DNA。然后再加入700ul的异丙醇。
然而之后的4'c ,20min离心并没有沉淀。

我想问是不是我理解错了,那个0.3M是包括异丙醇的。

还有基因组纯化用:苯酚,氯仿依次萃取再用醇提的。

请问对于基因组的纯化,两种方法哪种合适?

谢谢!!
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

异丙醇是有机溶剂,但不是所有有机溶剂都能使蛋白质变性,在我的实验里,异丙醇沉淀后的蛋白质会有40-50%能重新溶解在水里。

这两句话说的是保持溶液里.3  M,  pH  5.2,  final concentration,是最终浓度和pH值。然后加入溶液体积 0.6–0.7 volumes 倍的异丙醇,比如溶液体积是1毫升,异丙醇就加进去600-700微升,总体积大概1.6-1.7毫升。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2010-08-08 03:21:04
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