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银虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】关于基因组纯化的问题：异丙醇法已有3人参与

英文原文：
1. Adjust the salt concentration if necessary, for example, with sodium acetate (0.3 M, pH 5.2, final
concentration) or ammonium acetate (2.0–2.5 M, final concentration).
2. Add 0.6–0.7 volumes of room-temperature isopropanol to the DNA solution and mix well.
这两步我的操作是：
在0.3 M, pH 5.2的醋酸钠中加入20ul我的基因组DNA。然后再加入700ul的异丙醇。
然而之后的4'c ，20min离心并没有沉淀。

我想问是不是我理解错了，那个0.3M是包括异丙醇的。

还有基因组纯化用：苯酚，氯仿依次萃取再用醇提的。

请问对于基因组的纯化，两种方法哪种合适？

谢谢！！

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1楼 2010-08-07 20:49:40

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冼亮淀粉酶

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异丙醇是有机溶剂，但不是所有有机溶剂都能使蛋白质变性，在我的实验里，异丙醇沉淀后的蛋白质会有40-50%能重新溶解在水里。

这两句话说的是保持溶液里.3 M, pH 5.2, final concentration，是最终浓度和pH值。然后加入溶液体积 0.6–0.7 volumes 倍的异丙醇，比如溶液体积是1毫升，异丙醇就加进去600-700微升，总体积大概1.6-1.7毫升。

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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。

5楼2010-08-08 03:21:04