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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】异丙醇沉淀DNA
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xwsooo

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】异丙醇沉淀DNA已有18人参与

不知道为什么用异丙醇沉淀DNA，静置10分钟，离心10分钟，吸取上清后，怎么不见有DNA沉淀呀？？
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1楼2011-01-11 14:48:18
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
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DNA沉淀量少的话是看不到的。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-01-11 14:58:51
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xuchunhua2003

银虫 (初入文坛)
★ ★ ★
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翱宇(金币+2):谢谢经验分享，其实我们实验室沉淀RNA也用异丙醇，但是不要时间过长！ 2011-01-11 21:10:05
静止时间比较短，你可以冰上放置半小时，一般温度低地话比较容易看到析出的DNA，如果还看不到就离心一下，看试管底部有没有白色沉淀，如果还看不到的话，就少量溶解一下，凝胶电泳检测是不是有DNA
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3楼2011-01-11 15:12:39
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★
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reasonspare(金币+2):哈哈，够严谨。 2011-01-12 07:35:43
1、异丙醇商品是否可信？
2、异丙醇用量如何？
3、加异丙醇之后是否冷冻？
4、离心转速和时间如何？
5、既然没有沉淀，你怎么判断何为上清？
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
4楼2011-01-11 16:07:35
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haitian0625

金虫 (小有名气)
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reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2011-01-12 07:36:23
我们是裂解后，直接加入异丙醇，上下颠倒晃动，若看到沉淀多了，就直接挑出来；少了，离心10/15min，然后倒掉上清、晾干。
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5楼2011-01-11 16:19:38
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ziman2003

银虫 (小有名气)
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reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2011-01-12 07:36:30
一倍体积的异丙醇，室温沉淀10-20分钟。如果没有沉淀可能是DNA太少了。
也可以用1.5-2倍体积的无水乙醇沉淀DNA。
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6楼2011-01-11 17:26:06
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funny8125

银虫 (小有名气)
★ ★
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reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2011-01-12 07:36:37
一般情况下，我们用2/3体积异丙醇沉淀，混匀后就可以看见沉淀了。
如果DNA含量少的话，也可以-20度过夜，这样沉淀下来的DNA会比较多，但是，杂志也会相对增多，所以，后续除杂工作就比较麻烦了！
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人类一思考，上帝就发笑。
7楼2011-01-11 17:29:48
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smilefish06

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
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reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2011-01-12 07:36:54
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2011-01-12 07:37:43
有时异丙醇沉淀时是看不到DNA，DNA量特别大或含有杂质较多时会容易看到白色沉淀，一般离心后就能在管底看到少量沉淀
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做自己
8楼2011-01-11 17:45:57
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★
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rainwander(金币+1):对的~~~鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-11 21:28:59
沉淀下来的DNA是看不到的！必须跑电泳才可以看到！
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
9楼2011-01-11 20:37:22
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zmw_520

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★
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reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2011-01-12 07:37:35
本帖内容被屏蔽
10楼2011-01-11 21:03:27
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