24小时热门版块排行榜    

查看: 1709  |  回复: 10
本帖产生 1 个 博学EPI ,点击这里进行查看

wuweibewin

金虫 (正式写手)

[交流] DNA的沉淀问题

DNA(CTAB法大量提取,用于Southern杂交)用无水乙醇(或异丙醇)沉淀,发现有两种形态,一是DNA抱成团状,可用剪头移液枪转移;另一则是成散絮状(碎片状),只能用离心的方法得到沉淀;
谁能解释一下不同形态形成的原因?是否与DNA浓度、质量、以及材料处理方法有关?

本人今年一月份所沉的DNA均呈团状,而最近提的却既有团状又有碎片状,有一次甚至都是碎片状。

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

wuwei_hello@163.com
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏洛特1988

金虫 (小有名气)

wuweibewin(金币+5): 2010-06-08 16:30:28
楼主有没有考虑温度的影响,现在和一月份的温度上下相差超过十度啊!

还有楼主叙述的不详细,难道过去提取的和现在提取的DNA浓度质量,材料处理方式相差很大吗,楼主可否做一些重复性试验考察一下相关的条件的影响?
星尘与尘埃
2楼2010-06-07 17:57:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

柳飞絮

铜虫 (小有名气)

wuweibewin(金币+15, 博学EPI+1):谢谢回帖 参加讨论 2010-06-08 16:30:20
我感觉主要是浓度的问题,大了就成团了
一条小路曲曲折折细又长,一直通向迷蒙朦的远方~~~~
3楼2010-06-07 19:27:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangfili

禁虫 (正式写手)

wuweibewin(金币+5): 2010-06-08 16:30:48
本帖内容被屏蔽

4楼2010-06-07 19:50:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuweibewin

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 夏洛特1988 at 2010-06-07 17:57:32:
楼主有没有考虑温度的影响,现在和一月份的温度上下相差超过十度啊!

还有楼主叙述的不详细,难道过去提取的和现在提取的DNA浓度质量,材料处理方式相差很大吗,楼主可否做一些重复性试验考察一下相关的条件的 ...

我所做的一月份和现在都是一样的!实验过程都完全一样,而且当时是初学,现在都提了好多次了。而且现在做的里面也有抱成团状的!应该不是温度原因
wuwei_hello@163.com
5楼2010-06-07 20:39:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuweibewin

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by wangfili at 2010-06-07 19:50:24:
应该不是温度的原因吧,在实验室做实验都是恒温的呀!我个人觉得把上两次实验过程中的所有因素都进行对比,看有没有存在差异的地方,然后再按照相同的条件进行第三次实验,毕竟两次实验还是不能说明问题的。希望有 ...

我也比照过,完全没有问题都是严格按照实验步骤操作的,以及各种细节方面也没考虑到有什么问题。我也曾想过是量的原因,可是在书中没找到相关介绍,但却有对两种情况的DNA转移的方法!可见《分子克隆》496页“分离平均大小为100-150kb的DNA”的b、c条!
wuwei_hello@163.com
6楼2010-06-07 20:44:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuweibewin

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 柳飞絮 at 2010-06-07 19:27:41:
我感觉主要是浓度的问题,大了就成团了

我也觉得是浓度问题!但是我从叶片研磨程度,到取材的量都有所提高(比上次以及一月份)当反而六管却都成那样了!哪有做何解释?
wuwei_hello@163.com
7楼2010-06-07 20:45:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

柳飞絮

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by wuweibewin at 2010-06-07 20:45:57:

我也觉得是浓度问题!但是我从叶片研磨程度,到取材的量都有所提高(比上次以及一月份)当反而六管却都成那样了!哪有做何解释?

研磨程度增大DNA会不会发生断裂呢
一条小路曲曲折折细又长,一直通向迷蒙朦的远方~~~~
8楼2010-06-07 20:52:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuweibewin

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 柳飞絮 at 2010-06-07 20:52:04:

研磨程度增大DNA会不会发生断裂呢

这个应该不会!研磨程度再高,而不足以损害大分子物质!
不过后续实验发现,DNA纯度受到一定的影响
wuwei_hello@163.com
9楼2010-06-08 11:25:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuweibewin

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 柳飞絮 at 2010-06-07 20:52:04:

研磨程度增大DNA会不会发生断裂呢

现在看来主要是纯度问题,溶解DNA时发现有大量变性蛋白混入!
估计是  1、抽提时过于小心,未抽提完全
       2 、抽提离心后吸液时,吸到了中间层
       3、利用离心的方法获得沉淀,会是一些杂质也混入
第二遍抽提时抽提力度增加,洗液量减少,发现原来六管沉后又全呈团状了
wuwei_hello@163.com
10楼2010-06-08 16:28:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wuweibewin 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +12 enenenhui 2026-03-13 13/650 2026-03-16 08:30 by Linda Hu
[考研] 化学工程321分求调剂 +6 大米饭! 2026-03-15 6/300 2026-03-16 07:58 by wang_dand
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +6 一鸭鸭哟 2026-03-14 7/350 2026-03-15 22:12 by Winj1e
[考研] 中科院材料273求调剂 +3 yzydy 2026-03-15 3/150 2026-03-15 21:15 by ms629
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油!? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[考研] 328求调剂 +3 5201314Lsy! 2026-03-13 6/300 2026-03-14 15:31 by hyswxzs
[考研] 云南财经大学信息学院计算机学硕专硕学位点 +3 zjptai 2026-03-10 5/250 2026-03-14 01:23 by 飞行琦
[考研] 307求调剂 +7 超级伊昂大王 2026-03-10 7/350 2026-03-14 00:49 by JourneyLucky
[考研] 318求调剂 +3 李新光 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:21 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +6 Mochaaaa 2026-03-12 7/350 2026-03-13 22:18 by 星空星月
[考研] 0703化学求调剂 +7 绿豆芹菜汤 2026-03-12 7/350 2026-03-13 17:25 by njzyff
[考研] 考研调剂 +4 芬达46 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:04 by ruiyingmiao
[考研] 求调剂 +3 程雨杭 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:06 by JourneyLucky
[考研] 材料301分求调剂 +5 Liyouyumairs 2026-03-12 5/250 2026-03-13 14:42 by JourneyLucky
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂! +3 不想理你 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:18 by JourneyLucky
[考研] 0856化工原理 +6 z2839474511 2026-03-10 6/300 2026-03-13 10:41 by houyaoxu
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +4 薛云鹏 2026-03-13 4/200 2026-03-13 10:40 by 学员8dgXkO
[考研] 333求调剂 +3 152697 2026-03-12 4/200 2026-03-13 07:08 by Iveryant
[考研] 一志愿河海大学085900土木水利专硕279求调剂不挑专业 +4 SunWwWwWw 2026-03-10 8/400 2026-03-13 02:23 by SunWwWwWw
[考研] 纺织、生物、化学、材料相关专业招生了 +4 耶耶业 2026-03-09 7/350 2026-03-12 19:05 by Equinoxhua
信息提示
请填处理意见