| 查看: 862 | 回复: 2 | |||
神话米亚新虫 (初入文坛)
|
[求助]
虫友们！请教大家关于肠道菌DNA提取的问题
|
|
以下是我的提取过程，不吝赐教哈 1）将肠道研磨物500r/min离心5min,收集上清液，重复2次。将肠道微生物12000r/min离心10min沉淀，去上清液。加入480μL TE缓冲液，用吸管反复吹打使之重悬。 2）加入20μL 100mg/ml溶菌酶，使终浓度为4mg/mL，37°C温育20min。 3）加入30μL 10% SDS 和5μL 20mg/mL蛋白酶K，混匀，56°C温育40min。（期间可以轻柔振荡几次帮助裂解。） 4）加入100μL 5mol/LNaCl，充分混匀，再加入85μL CTAB/NaCl，混匀，65°C温育10min。 5）等体积（720ul）苯酚/氯仿/异戊醇（25:24:1）抽提两次，12000r/min离心5min，将上清液转移至新EP管中。第一次抽提后，加5μL 25mg/mlRNA酶，振荡均匀，37度水浴8min，之后进行第二次抽提。 6）加入0.6体积（450ul）异丙醇，轻轻混合直到DNA沉淀下来(冰箱静至半小时让DNA沉淀)12000r/min离心10min。 7）加入1mL 70%冰乙醇洗涤，（涡旋震荡起沉淀数秒钟）离心5min，弃上清，自然通风干燥20min，重溶于10μL的TE缓冲液中（65°C下水浴1小时重溶）。 将提取的总DNA用0.8%琼脂糖凝胶电泳检测。 希望大家帮我看看有没有问题哈。让我比较头疼是RNA酶要在什么时候加比较好，因为加完要让它起作用，又要最终除去。有考虑过在第三、四步的时候加，但是RNA酶怕蛋白酶K 和CTAB。所以就在抽提第一次后加，再在第二次抽提的时候除去。不知道可不可以？另外的问题是大家帮我看看各种试剂加的量有没有特别不合适的地方？》 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 分子生化实验经验积累 |
» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有190人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有7人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 鱼肠道微生物DNA的提取方法
已经有22人回复
- 请教几个关于微生物实验中定性细菌方法的中文全称
已经有5人回复
- 新提的质粒DNA，关于浓度和纯度虫友们发表一些看法吧
已经有32人回复
- 在DNA提取过程中遇到了困惑，希望朋友们可以解答一下,提DNA 的高手请进！！！
已经有15人回复
- 【求助/交流】肠道微生物DNA提取试剂盒的选择
已经有10人回复
- 【求助/交流】肠道微生物总DNA的提取
已经有5人回复
Myrainy1020
银虫 (小有名气)
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 1290.6
- 红花: 1
- 帖子: 272
- 在线: 219.5小时
- 虫号: 1679509
- 注册: 2012-03-10
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
2楼2013-03-25 22:54:02
神话米亚
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1.5
- 散金: 1
- 帖子: 11
- 在线: 5.8小时
- 虫号: 2193992
- 注册: 2012-12-18
- 性别: MM
- 专业: 农业有害生物检疫与入侵生
3楼2013-03-26 20:21:33
