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xiaoee2728

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】提基因组DNA,加了异丙醇没有DNA析出~~~ 已有9人参与

提基因组DNA,加了异丙醇-20度放置15min后离心,能看到明显的沉淀,再加入70%乙醇洗涤后发现沉淀溶解(可能是该试剂放置时间过长,乙醇已经挥发),然后加入等体积的异丙醇重新沉淀,离心后没有沉淀。
    然后听从了师兄的建议,又加了2.5倍体积的无水乙醇和十分之一体积的3M的醋酸钠,-20度放置15分钟后离心,仍未见沉淀,请问还有没有方法将DNA提取出来了,现在的总体积已经有7ml了。
     这个实验前期处理细胞很费时间,实在不想重新做了,希望各位牛人帮帮忙啊!
    万分感激~~~
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似水流年
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xiaoee2728

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by yuruoyuxue at 2011-03-03 12:51:31:
我用的是蛋白酶K的方法提取的,希望对你有帮助。在你说的第一步之后(-20度15min)底下的沉淀不是DNA而是多糖,蛋白质什么的杂质,而飘在沉淀上边的是DNA,不过是粉末状的,再往上就是丝状的DNA了。一般情况下,丝 ...

重新离心了一下,发现有沉淀,看来是析出的时间太短了。又放了一上午,现在已经在电泳了,希望能做出来~~
感谢大家的帮忙啊!
似水流年
9楼2011-03-03 17:33:12
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nininini

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看不到沉淀未必没有吧~~可以先电泳看看结果啊
2楼2011-03-03 10:49:26
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

凶多吉少了,估计得重提了
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
3楼2011-03-03 10:50:28
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-03 11:09:32
如果乙醇洗这一步,里头含了不少的水,那么DNA就溶解掉了……
太大体积的东西,醇很难沉淀下东西了,因为实在很稀
4楼2011-03-03 10:58:36
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