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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细菌基因组DNA抽提 用异丙醇沉淀很多
汕头大学海洋科学接受调剂
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tmoonday

金虫 (小有名气)

[求助] 细菌基因组DNA抽提 用异丙醇沉淀很多

小虫最近抽细菌总DNA遇到问题了，望各位大神指导
1用经典的酚氯仿异戊醇抽提DNA，酚氯仿异戊醇25：24:1混合两次，第二次中间没有太多蛋白，后氯仿异戊醇再混合一次，吸上清加0.6-0.7的异丙醇沉淀（-20℃），12000rpm离心10min发现有很多沉淀，70%乙醇洗涤后，沉淀不变，烘干后成白色，加dd水不容易溶，需要放到37℃放置一段时间才能溶。
2用NANODROP 测DNA浓度时，A260/A230在1.0-1.2左右，最高峰不是在260nm，靠近230，A260/A280在1.8-2.1左右
3跑琼脂糖胶的时候胶孔处有残留，抽出来的DNA不能被酶切（Bam I，EcoR I,Hind III,都试过酶切了12h以上）


请问这是出了什么问题，最近抽了好多次都是这个状况，实验室其他人员也是这个情况，偶尔也有抽的较好的，如图二。
最近快疯了，因为要建基因组文库，试剂盒抽的太淡了。跪求大神指导！！！！
细菌基因组DNA抽提 用异丙醇沉淀很多
图一异常的DNA.jpg


细菌基因组DNA抽提 用异丙醇沉淀很多-1
图二（前面是抽i的有问题的DNA，后面是正常的DNA）.jpg


细菌基因组DNA抽提 用异丙醇沉淀很多-2
图三BamI,EcoRI,Hind III酶切.jpg
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等一份缘分
1楼 2013-12-10 11:37:17
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tmoonday

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 梧桐柒夕 at 2013-12-10 16:52:08
试剂盒提取的一般量很多，OMEGA的，我用的时候，提取出来的量很多，230/260,260/280值都是2左右，很完美的值，比传统酚氯仿要好用一些。

你抽出来的量达到多少ng？
赞一下 回复此楼
等一份缘分
5楼2013-12-10 17:17:48
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yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
换个别的公司的试剂盒
你们实验室的水被污染了
。。。。。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-12-10 13:49:42
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tmoonday

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yang0071 at 2013-12-10 13:49:42
换个别的公司的试剂盒
你们实验室的水被污染了
。。。。。

我没有用试剂盒，还有我用的是dd水
赞一下 回复此楼
等一份缘分
3楼2013-12-10 16:17:32
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梧桐柒夕

主管区长 (文坛精英)

优秀区长优秀区长优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
试剂盒提取的一般量很多，OMEGA的，我用的时候，提取出来的量很多，230/260,260/280值都是2左右，很完美的值，比传统酚氯仿要好用一些。
赞一下 回复此楼
轻描淡写，浓墨重彩。
4楼2013-12-10 16:52:08
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