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tmoonday金虫 (小有名气)
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细菌基因组DNA抽提 用异丙醇沉淀很多
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小虫最近抽细菌总DNA遇到问题了，望各位大神指导 1用经典的酚氯仿异戊醇抽提DNA，酚氯仿异戊醇25：24:1混合两次，第二次中间没有太多蛋白，后氯仿异戊醇再混合一次，吸上清加0.6-0.7的异丙醇沉淀（-20℃），12000rpm离心10min发现有很多沉淀，70%乙醇洗涤后，沉淀不变，烘干后成白色，加dd水不容易溶，需要放到37℃放置一段时间才能溶。 2用NANODROP 测DNA浓度时，A260/A230在1.0-1.2左右，最高峰不是在260nm，靠近230，A260/A280在1.8-2.1左右 3跑琼脂糖胶的时候胶孔处有残留，抽出来的DNA不能被酶切（Bam I，EcoR I,Hind III,都试过酶切了12h以上） 请问这是出了什么问题，最近抽了好多次都是这个状况，实验室其他人员也是这个情况，偶尔也有抽的较好的，如图二。 最近快疯了，因为要建基因组文库，试剂盒抽的太淡了。跪求大神指导！！！！  图一异常的DNA.jpg  图二（前面是抽i的有问题的DNA，后面是正常的DNA）.jpg  图三BamI,EcoRI,Hind III酶切.jpg |
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tmoonday
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