| 查看: 2715 | 回复: 16 | ||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||
mche2005木虫 (正式写手)
7-5-3
|
[求助]
在用CTAB法提取曲霉总DNA时，提取很多次没有成功，期望大家多多帮助。
|
|
|
1、PDA培养适当时间（72h），真菌菌丝体9000转离心3min，滤纸吸水。吸除绝大部分水分，否则，含水量过大会严重影响液氮研磨的效率。 或者直接用灭菌的八折纱布进行过滤。 2、研钵（液氮研磨）至粉末。快速研磨，严防液氮溅射。研磨过程中防止样品因为液氮挥发所导致的冻融。 3、加入预热的CTAB700uL，轻柔的颠倒混匀，65℃水浴1h（每隔10min摇一次），室温12000rpm，10min，吸取上清。 4、加入等体积的氯仿：异戊醇（24:1），12000rpm，5min，取上清（500uL）。 5、加入等体积的氯仿：异戊醇（24:1），12000rpm，5min，4℃离心后，取上清液（500uL）。 6、加入-20℃预先冷存异丙醇（2/3体积），-20℃冰箱沉淀1h。12000rpm，10min，4℃离心后取上清。 7、75%乙醇洗涤2次，12000rpm，3min，4℃离心。 8、室温晾干10-15min，加入20-50uL TE溶解。 9、加入RNase A (10 mg/mL) ,37℃保温30 min 以上。 10、取 4u L 电泳。加入1uL Rnase 37摄氏度消化30min，电泳检测结果 结果，提了很多次都没有成功，请问是什么原因？ |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有242人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有8人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 环境样品地下水中细菌总DNA的提取方法
已经有23人回复
- CTAB法提取RNA
已经有12人回复
- CTAB 基因提取方法的问题
已经有10人回复
- 大家都用什么方法提取植物DNA
已经有19人回复
- CTAB提取细菌DNA
已经有15人回复
- 【求助/交流】CTAB 法提取DNA，克隆基因全长？
已经有7人回复
- 【求助/交流】CTAB法提取了dna，帮我看看图片，帮忙提点改进方法
已经有20人回复
- 【求助/交流】急！ 帮忙分析下CTAB法提取真菌DNA的电泳图
已经有4人回复
- 【求助/交流】细菌基因组DNA的提取法（CTAB/NaCl 法）,提取的DNA是否为细菌总DNA? 非�
已经有11人回复
- 【求助/交流】有没有人做过用水煮法提取DNA的啊，望赐教
已经有21人回复
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
mche2005: 金币+2, ★★★很有帮助, 你有没有试过如果不加CTAB沉淀剂的情况下，能不能提出来总DNA？ 2012-05-25 10:14:48
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, 热心回帖，一起奖励EPI一枚~ 2012-05-26 10:52:51
mche2005: 金币+2, ★★★很有帮助, 你有没有试过如果不加CTAB沉淀剂的情况下，能不能提出来总DNA？ 2012-05-25 10:14:48
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, 热心回帖，一起奖励EPI一枚~ 2012-05-26 10:52:51
|
给你一个我当时提DNA的详细步骤吧，有问题欢迎继续交流吧! 取50 mg 菌丝，加入液氮研磨成粉末状，加入600 µL CTAB 抽提液（2% CTAB，100 mmol Tris-HCl （pH 8.0），20 mmol EDTA，1.4 mol NaCl，pH 8.0，2% β-巯基乙醇）中，65℃温浴1 h。在抽提液中加入650 µL 氯仿-异戊醇（24﹕1），混匀后离心取上清，同法再抽提1遍。在上清中加入1 mL CTAB 沉淀液[1% CTAB，50 mmol Tris-HCl（pH 8.0），10 mmol EDTA]，室温沉淀30 min，12 000 r/min 离心4 min，倒上清，将沉淀溶于 400 µL 高盐 TE[10 mmol Tris-HCl（pH 8.0），0.1 mmol EDTA，1 mol NaCl]，37℃30 min 溶解。加入两倍体积-20℃无水乙醇在20℃沉淀2 h，12 000 r/min 离心5 min，风干后加入80 µL TE。取4 µL DNA 在1.5% 琼脂糖凝胶上电泳，剩余DNA-20℃保存备用. |
14楼2012-05-25 09:10:07
cxfans
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 6821.2
- 散金: 186
- 红花: 11
- 沙发: 19
- 帖子: 1957
- 在线: 340.8小时
- 虫号: 1058717
- 注册: 2010-07-16
- 性别: GG
- 专业: 植物病理学
2楼2012-05-23 11:32:52
3楼2012-05-23 11:56:35
4楼2012-05-23 16:37:40
5楼2012-05-23 17:14:09
★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-23 21:48:20
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-23 21:48:20
|
本帖内容被屏蔽 |
6楼2012-05-23 17:24:32
elbo
金虫 (小有名气)
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 1003.7
- 散金: 468
- 红花: 2
- 帖子: 231
- 在线: 119.9小时
- 虫号: 954540
- 注册: 2010-02-10
- 性别: GG
- 专业: 微生物生态学
7楼2012-05-23 21:23:02
8楼2012-05-23 22:29:25
mche2005
木虫 (正式写手)
7-5-3
- MolEPI: 1
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 2811.7
- 散金: 63
- 红花: 7
- 帖子: 455
- 在线: 135.5小时
- 虫号: 1198543
- 注册: 2011-02-01
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
9楼2012-05-24 09:16:34
10楼2012-05-24 10:39:55
