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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 在用CTAB法提取曲霉总DNA时，提取很多次没有成功，期望大家多多帮助。
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jingdejun

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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小丹木木: 金币+3, 我仔细看了下，好像真是这个问题诶，你好细心啊 2012-05-24 13:49:41
问题不是已经找出来了吗？

第六步，异丙醇沉淀、离心之后是“弃上清”，而不是“取上清”。

因为我们要的东西都已经沉淀下来了，上清取来做什么？
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11楼2012-05-24 10:41:28
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霸_霸

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
试剂盒吧 霉菌dna手提不容易 试剂盒很便宜的
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12楼2012-05-24 14:13:25
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wsw2t

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
mche2005: 金币+5, ★★★很有帮助, 非常感谢您的应助。您说的这两种CTAB的浓度是多少？ 2012-05-24 19:56:23
我以前提过子囊菌的DNA，很好提的，我看了你的步骤，大概有以下几点建议：
1. 可以试试用浅层液体培养菌丝，所谓浅层，就是用50ml的三角瓶，加约10ml的液体培养基吧，反正就是让菌丝长得薄薄一层，这样取菌丝的时候就很方便了，只需要用滤纸把菌丝吸干就可以研磨了
2. 液氮研磨要充分
3. 你的步骤里最严重的问题是，CTAB，我当时用的CTAB配了两种，一种是CTAB抽提液，一种是CTAB沉淀液。在氯仿异戊醇洗完两遍后，往上清里加CTAB沉淀液
4. CTAB沉淀液加完后沉淀30min，12000rpm离心，得沉淀后，将沉淀溶于高盐TE中，然后加入两倍体积的无水乙醇放在-20沉淀，顺利的话，乙醇一加进去就能看到沉淀了，那就是DNA啊！

反正从你的步骤看，主要是没有用CTAB沉淀液，我觉得，呵呵
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13楼2012-05-24 16:56:02
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wsw2t

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
mche2005: 金币+2, ★★★很有帮助, 你有没有试过如果不加CTAB沉淀剂的情况下，能不能提出来总DNA？ 2012-05-25 10:14:48
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, 热心回帖，一起奖励EPI一枚~ 2012-05-26 10:52:51
给你一个我当时提DNA的详细步骤吧，有问题欢迎继续交流吧!
取50 mg  菌丝，加入液氮研磨成粉末状，加入600 µL CTAB  抽提液（2% CTAB，100 mmol Tris-HCl （pH 8.0），20 mmol EDTA，1.4 mol NaCl，pH 8.0，2% β-巯基乙醇）中，65℃温浴1 h。在抽提液中加入650 µL  氯仿-异戊醇（24﹕1），混匀后离心取上清，同法再抽提1遍。在上清中加入1 mL CTAB 沉淀液[1% CTAB，50 mmol Tris-HCl（pH 8.0），10 mmol EDTA]，室温沉淀30 min，12 000 r/min 离心4 min，倒上清，将沉淀溶于 400 µL  高盐 TE[10 mmol Tris-HCl（pH 8.0），0.1 mmol EDTA，1 mol NaCl]，37℃30 min  溶解。加入两倍体积-20℃无水乙醇在20℃沉淀2 h，12 000 r/min 离心5 min，风干后加入80 µL TE。取4 µL DNA  在1.5%  琼脂糖凝胶上电泳，剩余DNA-20℃保存备用.
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14楼2012-05-25 09:10:07
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wsw2t

银虫 (初入文坛)
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15楼2012-05-25 10:48:12
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cai3110274

木虫 (职业作家)
CTAB法适合提取酵母基因组DNA吗
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夫天地者万物之逆旅
16楼2012-05-25 21:44:36
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AnaSequence

金虫 (小有名气)
CTAB吸附和解离DNA与盐离子浓度有很大关系。
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17楼2012-05-26 15:40:39
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