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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 在用CTAB法提取曲霉总DNA时，提取很多次没有成功，期望大家多多帮助。
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银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
mche2005: 金币+2, ★★★很有帮助, 你有没有试过如果不加CTAB沉淀剂的情况下，能不能提出来总DNA？ 2012-05-25 10:14:48
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, 热心回帖，一起奖励EPI一枚~ 2012-05-26 10:52:51
给你一个我当时提DNA的详细步骤吧，有问题欢迎继续交流吧!
取50 mg  菌丝，加入液氮研磨成粉末状，加入600 µL CTAB  抽提液（2% CTAB，100 mmol Tris-HCl （pH 8.0），20 mmol EDTA，1.4 mol NaCl，pH 8.0，2% β-巯基乙醇）中，65℃温浴1 h。在抽提液中加入650 µL  氯仿-异戊醇（24﹕1），混匀后离心取上清，同法再抽提1遍。在上清中加入1 mL CTAB 沉淀液[1% CTAB，50 mmol Tris-HCl（pH 8.0），10 mmol EDTA]，室温沉淀30 min，12 000 r/min 离心4 min，倒上清，将沉淀溶于 400 µL  高盐 TE[10 mmol Tris-HCl（pH 8.0），0.1 mmol EDTA，1 mol NaCl]，37℃30 min  溶解。加入两倍体积-20℃无水乙醇在20℃沉淀2 h，12 000 r/min 离心5 min，风干后加入80 µL TE。取4 µL DNA  在1.5%  琼脂糖凝胶上电泳，剩余DNA-20℃保存备用.
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14楼2012-05-25 09:10:07
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