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mche2005木虫 (正式写手)
7-5-3
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[求助]
在用CTAB法提取曲霉总DNA时，提取很多次没有成功，期望大家多多帮助。
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1、PDA培养适当时间（72h），真菌菌丝体9000转离心3min，滤纸吸水。吸除绝大部分水分，否则，含水量过大会严重影响液氮研磨的效率。 或者直接用灭菌的八折纱布进行过滤。 2、研钵（液氮研磨）至粉末。快速研磨，严防液氮溅射。研磨过程中防止样品因为液氮挥发所导致的冻融。 3、加入预热的CTAB700uL，轻柔的颠倒混匀，65℃水浴1h（每隔10min摇一次），室温12000rpm，10min，吸取上清。 4、加入等体积的氯仿：异戊醇（24:1），12000rpm，5min，取上清（500uL）。 5、加入等体积的氯仿：异戊醇（24:1），12000rpm，5min，4℃离心后，取上清液（500uL）。 6、加入-20℃预先冷存异丙醇（2/3体积），-20℃冰箱沉淀1h。12000rpm，10min，4℃离心后取上清。 7、75%乙醇洗涤2次，12000rpm，3min，4℃离心。 8、室温晾干10-15min，加入20-50uL TE溶解。 9、加入RNase A (10 mg/mL) ,37℃保温30 min 以上。 10、取 4u L 电泳。加入1uL Rnase 37摄氏度消化30min，电泳检测结果 结果，提了很多次都没有成功，请问是什么原因？ |
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感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-23 21:48:20
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6楼2012-05-23 17:24:32