| 查看: 2680 | 回复: 16 | ||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
mche2005木虫 (正式写手)
7-5-3
|
[求助]
在用CTAB法提取曲霉总DNA时，提取很多次没有成功，期望大家多多帮助。
|
|
|
1、PDA培养适当时间（72h），真菌菌丝体9000转离心3min，滤纸吸水。吸除绝大部分水分，否则，含水量过大会严重影响液氮研磨的效率。 或者直接用灭菌的八折纱布进行过滤。 2、研钵（液氮研磨）至粉末。快速研磨，严防液氮溅射。研磨过程中防止样品因为液氮挥发所导致的冻融。 3、加入预热的CTAB700uL，轻柔的颠倒混匀，65℃水浴1h（每隔10min摇一次），室温12000rpm，10min，吸取上清。 4、加入等体积的氯仿：异戊醇（24:1），12000rpm，5min，取上清（500uL）。 5、加入等体积的氯仿：异戊醇（24:1），12000rpm，5min，4℃离心后，取上清液（500uL）。 6、加入-20℃预先冷存异丙醇（2/3体积），-20℃冰箱沉淀1h。12000rpm，10min，4℃离心后取上清。 7、75%乙醇洗涤2次，12000rpm，3min，4℃离心。 8、室温晾干10-15min，加入20-50uL TE溶解。 9、加入RNase A (10 mg/mL) ,37℃保温30 min 以上。 10、取 4u L 电泳。加入1uL Rnase 37摄氏度消化30min，电泳检测结果 结果，提了很多次都没有成功，请问是什么原因？ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有197人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 环境样品地下水中细菌总DNA的提取方法
已经有23人回复
- CTAB法提取RNA
已经有12人回复
- CTAB 基因提取方法的问题
已经有10人回复
- 大家都用什么方法提取植物DNA
已经有19人回复
- CTAB提取细菌DNA
已经有15人回复
- 【求助/交流】CTAB 法提取DNA，克隆基因全长？
已经有7人回复
- 【求助/交流】CTAB法提取了dna，帮我看看图片，帮忙提点改进方法
已经有20人回复
- 【求助/交流】急！ 帮忙分析下CTAB法提取真菌DNA的电泳图
已经有4人回复
- 【求助/交流】细菌基因组DNA的提取法（CTAB/NaCl 法）,提取的DNA是否为细菌总DNA? 非�
已经有11人回复
- 【求助/交流】有没有人做过用水煮法提取DNA的啊，望赐教
已经有21人回复
5楼2012-05-23 17:14:09
cxfans
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 6821.2
- 散金: 186
- 红花: 11
- 沙发: 19
- 帖子: 1957
- 在线: 340.8小时
- 虫号: 1058717
- 注册: 2010-07-16
- 性别: GG
- 专业: 植物病理学
2楼2012-05-23 11:32:52
3楼2012-05-23 11:56:35
4楼2012-05-23 16:37:40
