24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (1205)
>导师招生 (733)
>虫友互识 (320)
>休闲灌水 (303)
>招聘信息布告栏 (123)
>博后之家 (67)
>论文投稿 (42)
>教师之家 (30)
>硕博家园 (30)
>考研 (23)
>公派出国 (15)
>学术会议 (14)
>考博 (13)
>生物科学 (10)
>基金申请 (9)
>分子生物 (5)

返回列表

本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

mche2005

木虫 (正式写手)

7-5-3

MolEPI: 1
应助: 11 (小学生)
金币: 2811.7
散金: 63
红花: 7
帖子: 455
在线: 135.5小时
虫号: 1198543
注册: 2011-02-01
性别: GG
专业: 微生物生理与生物化学

[求助] 在用CTAB法提取曲霉总DNA时，提取很多次没有成功，期望大家多多帮助。

1、PDA培养适当时间（72h），真菌菌丝体9000转离心3min，滤纸吸水。吸除绝大部分水分，否则，含水量过大会严重影响液氮研磨的效率。
或者直接用灭菌的八折纱布进行过滤。
2、研钵（液氮研磨）至粉末。快速研磨，严防液氮溅射。研磨过程中防止样品因为液氮挥发所导致的冻融。
3、加入预热的CTAB700uL，轻柔的颠倒混匀，65℃水浴1h（每隔10min摇一次），室温12000rpm，10min，吸取上清。
4、加入等体积的氯仿：异戊醇（24:1），12000rpm，5min，取上清（500uL）。
5、加入等体积的氯仿：异戊醇（24:1），12000rpm，5min，4℃离心后，取上清液（500uL）。
6、加入-20℃预先冷存异丙醇（2/3体积），-20℃冰箱沉淀1h。12000rpm，10min，4℃离心后取上清。
7、75%乙醇洗涤2次，12000rpm，3min，4℃离心。
8、室温晾干10-15min，加入20-50uL TE溶解。
9、加入RNase A (10 mg/mL) ,37℃保温30 min 以上。
10、取 4u L 电泳。加入1uL Rnase 37摄氏度消化30min，电泳检测结果

结果，提了很多次都没有成功，请问是什么原因？

回复此楼

» 猜你喜欢

HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？已经有0人回复
His标签蛋白纯化怎么才能快？已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有86人回复
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析已经有0人回复
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用已经有0人回复
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点已经有0人回复
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用已经有0人回复
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点已经有0人回复
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？已经有0人回复
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析已经有0人回复
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性已经有0人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

环境样品地下水中细菌总DNA的提取方法已经有23人回复
CTAB法提取RNA 已经有12人回复
CTAB 基因提取方法的问题已经有10人回复
大家都用什么方法提取植物DNA 已经有19人回复
CTAB提取细菌DNA 已经有15人回复
【求助/交流】CTAB 法提取DNA，克隆基因全长？已经有7人回复
【求助/交流】CTAB法提取了dna，帮我看看图片，帮忙提点改进方法已经有20人回复
【求助/交流】急！帮忙分析下CTAB法提取真菌DNA的电泳图已经有4人回复
【求助/交流】细菌基因组DNA的提取法（CTAB/NaCl 法）,提取的DNA是否为细菌总DNA? 非� 已经有11人回复
【求助/交流】有没有人做过用水煮法提取DNA的啊，望赐教已经有21人回复

1楼 2012-05-23 11:23:36

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

回帖置顶 ( 共有1个 )

wsw2t

银虫 (初入文坛)

MolEPI: 1
应助: 1 (幼儿园)
金币: 261.9
散金: 28
帖子: 37
在线: 36.6小时
虫号: 1395930
注册: 2011-09-09
专业: 食品科学基础

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
mche2005: 金币+2, ★★★很有帮助, 你有没有试过如果不加CTAB沉淀剂的情况下，能不能提出来总DNA？ 2012-05-25 10:14:48
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, 热心回帖，一起奖励EPI一枚~ 2012-05-26 10:52:51

给你一个我当时提DNA的详细步骤吧，有问题欢迎继续交流吧!
取50 mg 菌丝，加入液氮研磨成粉末状，加入600 µL CTAB 抽提液（2% CTAB，100 mmol Tris-HCl （pH 8.0），20 mmol EDTA，1.4 mol NaCl，pH 8.0，2% β-巯基乙醇）中，65℃温浴1 h。在抽提液中加入650 µL 氯仿-异戊醇（24﹕1），混匀后离心取上清，同法再抽提1遍。在上清中加入1 mL CTAB 沉淀液[1% CTAB，50 mmol Tris-HCl（pH 8.0），10 mmol EDTA]，室温沉淀30 min，12 000 r/min 离心4 min，倒上清，将沉淀溶于 400 µL 高盐 TE[10 mmol Tris-HCl（pH 8.0），0.1 mmol EDTA，1 mol NaCl]，37℃30 min 溶解。加入两倍体积-20℃无水乙醇在20℃沉淀2 h，12 000 r/min 离心5 min，风干后加入80 µL TE。取4 µL DNA 在1.5% 琼脂糖凝胶上电泳，剩余DNA-20℃保存备用.