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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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hraikeyan

金虫 (小有名气)

[求助] 小片段基因文库构建中载体的选择

各位虫友:我现在需要构建一个细菌的基因文库。基因片段控制在2-6kb之间,是采用目标酶的活性进行筛选,筛选过程是在96孔板中进行的。我在一些文献中看到很多人构建文库都是采用puc19作为载体,然后转化到DH5α中,在平板上根据酶活筛选出目标克隆子。我的问题是:PUC19是克隆载体,以他为载体能表达出酶吗?以puc19为载体固然是好,它能进行蓝白斑筛选,这样可以节省很大一部分工作量,但是我实在96孔板中以酶活为评价标准筛,能用puc19载体吗?
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nothing isimpossible
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
hraikeyan: 金币+2 2012-11-05 12:01:40
原则上是可以的,利用细菌自身的启动子,在大肠杆菌中可以表达出蛋白来的...
2楼2012-11-02 12:38:02
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hraikeyan

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 克隆大虾 at 2012-11-02 12:38:02
原则上是可以的,利用细菌自身的启动子,在大肠杆菌中可以表达出蛋白来的...

还有一问题,我在最后基因组评价过程中,需要知道基因组的大小来确定所需要的克隆子数目,可基因组的大小事根据跑电泳来确定的吗?
nothing isimpossible
3楼2012-11-05 12:04:53
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by hraikeyan at 2012-11-05 12:04:53
还有一问题,我在最后基因组评价过程中,需要知道基因组的大小来确定所需要的克隆子数目,可基因组的大小事根据跑电泳来确定的吗?...

如果跑脉冲场的话,可以推测基因组大小.
4楼2012-11-05 12:21:10
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
hraikeyan: 金币+6 2012-11-06 16:21:36
我们一般都是估测...根据已知种属的细菌基因组大小...
5楼2012-11-05 12:22:20
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

有问题,可以及时跟我沟通...
6楼2012-11-06 18:11:15
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hraikeyan

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 克隆大虾 at 2012-11-06 18:11:15
有问题,可以及时跟我沟通...

好的,谢谢啦
nothing isimpossible
7楼2012-11-06 23:42:04
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hraikeyan

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 克隆大虾 at 2012-11-06 18:11:15
有问题,可以及时跟我沟通...

基因组用sau3A酶切,再跑电泳后,我的目标目标片段(2-6kb)是用胶回收试剂盒回收好呢?还是用电洗脱方法回收好呢?因为我看很多人说试剂盒回收后含量会降低,我们实验室没有核酸含量测定的仪器,只能自己大概估计。
nothing isimpossible
8楼2012-11-06 23:54:34
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hraikeyan

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 克隆大虾 at 2012-11-06 18:11:15
有问题,可以及时跟我沟通...

还有一个问题:切胶回收后,还需要酚氯仿抽提纯化吗?我们实验室的胶回收试剂盒效率还是比较高的。
nothing isimpossible
9楼2012-11-06 23:58:55
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by hraikeyan at 2012-11-06 23:58:55
还有一个问题:切胶回收后,还需要酚氯仿抽提纯化吗?我们实验室的胶回收试剂盒效率还是比较高的。...

切胶后,不需要酚氯仿抽提,如果浓度可以的话,直接连接。
10楼2012-11-07 00:28:18
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