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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 小片段基因文库构建中载体的选择
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hraikeyan

金虫 (小有名气)

[求助] 小片段基因文库构建中载体的选择

各位虫友：我现在需要构建一个细菌的基因文库。基因片段控制在2-6kb之间，是采用目标酶的活性进行筛选，筛选过程是在96孔板中进行的。我在一些文献中看到很多人构建文库都是采用puc19作为载体，然后转化到DH5α中，在平板上根据酶活筛选出目标克隆子。我的问题是：PUC19是克隆载体，以他为载体能表达出酶吗？以puc19为载体固然是好，它能进行蓝白斑筛选，这样可以节省很大一部分工作量，但是我实在96孔板中以酶活为评价标准筛，能用puc19载体吗？
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nothing isimpossible
1楼 2012-11-01 23:19:08
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hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 克隆大虾 at 2012-11-06 18:11:15
有问题，可以及时跟我沟通...

基因组用sau3A酶切，再跑电泳后，我的目标目标片段（2-6kb)是用胶回收试剂盒回收好呢？还是用电洗脱方法回收好呢？因为我看很多人说试剂盒回收后含量会降低，我们实验室没有核酸含量测定的仪器，只能自己大概估计。
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nothing isimpossible
8楼2012-11-06 23:54:34
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hraikeyan: 金币+2 2012-11-05 12:01:40
原则上是可以的，利用细菌自身的启动子，在大肠杆菌中可以表达出蛋白来的...
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2楼2012-11-02 12:38:02
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hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 克隆大虾 at 2012-11-02 12:38:02
原则上是可以的，利用细菌自身的启动子，在大肠杆菌中可以表达出蛋白来的...

还有一问题，我在最后基因组评价过程中，需要知道基因组的大小来确定所需要的克隆子数目，可基因组的大小事根据跑电泳来确定的吗？
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nothing isimpossible
3楼2012-11-05 12:04:53
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by hraikeyan at 2012-11-05 12:04:53
还有一问题，我在最后基因组评价过程中，需要知道基因组的大小来确定所需要的克隆子数目，可基因组的大小事根据跑电泳来确定的吗？...

如果跑脉冲场的话，可以推测基因组大小.
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4楼2012-11-05 12:21:10
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