小片段基因文库构建中载体的选择 - 分子生物 - 综合其他

11楼2012-11-07 00:29:00

克隆大虾

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我们一般构建cosmid文库...可插入外源片段30-50kb.

12楼2012-11-07 00:31:41

hraikeyan

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引用回帖:

11楼: Originally posted by 克隆大虾 at 2012-11-07 00:29:00
你小试酶切结果咋样？基因组要多切些.....

我还没做到那一步，就想先问清楚了，到时候出问题了就知道怎么办了？

nothing isimpossible

13楼2012-11-07 18:35:45

hraikeyan

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引用回帖:

10楼: Originally posted by 克隆大虾 at 2012-11-07 00:28:18
切胶后，不需要酚氯仿抽提，如果浓度可以的话，直接连接。...

您好：现在我在提基因组时就出问题了，我是用溶菌酶，蛋白酶K处理后，用异丙醇析出DNA，再用酚，氯仿抽提。上学期也做过这个菌的基因组提取，效果还挺好，可是最近连着做了三次，都没有做出来。三次的现象是这样的：
第一次：取4ml菌，在蛋白酶K处理后，离心，取上清，可是沉淀是很粘稠的一坨，吸不上来；最后在加入异丙醇后，没有丝状物出现（上次是有丝状物出现）。怀疑菌量太多。
第二次“取1.5ml菌，蛋白酶K处理后，溶液离心，一点都不粘稠，很容易就把上清分离出来，但是加入异丙醇后还是没有丝状物出现，只是变浑浊了，直到最后一步，也没有沉淀出现。
我一直怀疑是在溶菌酶处理，蛋白酶K处理时有问题，但都是按之前的步骤来的，怎么也提不出来。

nothing isimpossible

14楼2012-11-12 00:20:56