| 查看: 1334 | 回复: 3 | ||
| 本帖产生 1 个 APEPI ，点击这里进行查看 | ||
[求助]
油菜DNA提取问题，用的CTAB法提取，要求质量高点
|
||
| 如题，dna用来做snp，是用液氮磨样还是用打样机打样提的质量好，有经验的告诉一下 |
回复此楼» 猜你喜欢
江苏省优青门槛
已经有20人回复
-
心好累。今年我们部门提交了18个项目。中了11了，可惜我的又挂了
已经有10人回复
-
植物学论文润色/翻译怎么收费?
已经有291人回复
-
面上项目计划书
已经有7人回复
-
面上项目计划书附件
已经有9人回复
-
面上项目计划书系统状态
已经有18人回复
-
NSFC-UNEP（与联合国环境规划署）合作项目
已经有33人回复
-
和伊朗人合作
已经有32人回复
-
江苏省自然基金
已经有8人回复
-
生命科学新英文普刊《INVESTIGATION OF LIFE SCIENCE》
已经有10人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 用CTAB法提取细菌基因组DNA时，为何离心效果不好
已经有4人回复
- 马上要开始做CTAB提乳酸菌DNA了，各位大神帮忙看看实验步骤有木有啥致命问题额
已经有5人回复
- CTAB提取木头DNA量少杂质多，请问如何解决？
已经有8人回复
- CTAB法提取DNA
已经有19人回复
- 提取土壤DNA时如何配制CTAB缓冲液？
已经有4人回复
- 在用CTAB法提取曲霉总DNA时，提取很多次没有成功，期望大家多多帮助。
已经有16人回复
- ctab法提取昆虫基因组DNA A260/A280偏高
已经有4人回复
- 第一次提DNA，急求方法：油菜DNA，用于PCR~~谢各位大侠
已经有8人回复
- CTAB提取液保存了一段时间，有白色漂浮物，可以用来直接提取真菌DNA吗？
已经有3人回复
- CTAB提取细菌DNA
已经有15人回复
- 用真菌CTAB方法提细菌DNA可否？
已经有6人回复
- CTAB提取DNA，一个小问题
已经有4人回复
- 【求助/交流】CTAB 法提取DNA，克隆基因全长？
已经有7人回复
- 【求助/交流】CTAB法提取了dna，帮我看看图片，帮忙提点改进方法
已经有20人回复
- 【求助/交流】急！ 帮忙分析下CTAB法提取真菌DNA的电泳图
已经有4人回复
- 【求助/交流】急！！CTAB提取液4度保存，有白色絮状物，可以用来直接提取植物DNA吗？
已经有4人回复
- 【求助/交流】细菌基因组DNA的提取法（CTAB/NaCl 法）,提取的DNA是否为细菌总DNA? 非�
已经有11人回复
- 【求助/交流】植物基因组DNA提取（CTAB法）
已经有7人回复
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
帝封天下: 金币+20, ★有帮助 2012-12-12 21:13:08
amisking: 回帖置顶 2012-12-12 22:48:30
amisking: 金币+5, APEPI+1, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2012-12-12 22:48:39
感谢参与，应助指数 +1
帝封天下: 金币+20, ★有帮助 2012-12-12 21:13:08
amisking: 回帖置顶 2012-12-12 22:48:30
amisking: 金币+5, APEPI+1, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2012-12-12 22:48:39
|
基因组DNA提取 试剂与溶液 (1)2%CTAB抽提缓冲溶液：CTAB4g，NaCl16.364g，先用70mLddH2O溶解，再加入1mol/L Tris-HCl(pH8.0)20mL、0.5mol/LEDTA(pH8.0)8mL，定容至200mL。灭菌，冷却后加入0.2%-1%琉基乙醇400μL。 (2)氯仿︰异戊醇=24︰1(V/V)：先加96mL氯仿，再加4mL异戊醇，摇匀。 (3)0.5mol/LEDTA(pH8.0)：186.21gNa2EDTA•2H2O溶于750mLddH2O，加入2mol/LNaOH至pH8.0，用ddH2O定容至1000mL。 (4)1mol/L Tris-HCl(pH8.0)：121g Tris碱溶于750mLddH2O，加浓HCl至pH8.0，ddH2O定容至1000mL。 (5)TE缓冲液：1mol/LTris-HCl(pH8.0)5mL，0.5mol/LEDTA(pH8.0)1mL，ddH2O定容至500mL。 (6)10mg/mL RNase A(-20℃保存)：1mol/LTris-HCl(pH8.0)10μL，0.5mol/LNaCl30μL，RNase A10mg，ddH2O定容至1mL。 (7)75%乙醇：取无水乙醇375mL，加ddH2O至500mL。 (8)异丙醇 (7)、(8)使用前冷藏1-2小时。 方法与步骤 (1)将油菜自交系的种子在实验室内进行暗培养，待长至一定高度时，取幼嫩叶片作为提取DNA的材料。 (2)将2%CTAB提取液放入65℃水浴中预热5分钟。 (3)称取0.3-0.5g幼嫩叶片，放入研钵，加液氮后迅速研磨成粉末状。 (4)将叶片粉末迅速、小心地刮入2mL离心管中，加入1.0mL 65℃预热的2%CTAB提取液，颠倒混匀。 (5)将离心管放入65℃水浴中，保温40分钟，其间轻摇几次。 (6)取出离心管，在室温下放置1-2分钟，加入氯仿︰异戊醇(24︰1)至满管，上下颠倒摇晃2-3min，待两者混合均匀，以12000r/min的速度离心6min。 (7)移液器吸取上清至1.5mL灭菌离心管中，加入等体积异丙醇，上下颠倒摇匀约30s，使异丙醇与水层充分混合至能见到DNA絮状物。 (8)以12000r/min离心5min，倒掉液体，注意勿将白色DNA沉淀倒出，将离心管倒立与铺开的纸巾上。 (9)60s后，直立离心管，用75%的乙醇洗2-3次，置于超净工作台风干(1-2h即可，若过分干燥，DNA沉淀会较难溶解)。 (10)加入50μL含RNase A(浓度10µg/mL)的TE缓冲液，37℃保温1-2小时，-20℃冷藏备用；在0.8%琼脂糖凝胶电泳上检查DNA完整性。 (11)利用分光光度计检测DNA的浓度及纯度，并稀释至60ng/µL备用。 |
3楼2012-12-12 20:41:44
xy656691
金虫 (正式写手)
- APEPI: 1
- 应助: 37 (小学生)
- 贵宾: 0.248
- 金币: 1404.8
- 散金: 772
- 红花: 12
- 帖子: 751
- 在线: 158.2小时
- 虫号: 1681902
- 注册: 2012-03-11
- 性别: GG
- 专业: 免疫学研究新技术与新方法
2楼2012-12-11 14:49:55
lanqingkuo
木虫 (小有名气)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 2610.1
- 散金: 20
- 红花: 1
- 帖子: 242
- 在线: 72.5小时
- 虫号: 1338757
- 注册: 2011-07-06
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
|
预处理样品中加入800 µL裂解缓冲液、10 µL蛋白酶K（20 mg/ml）和5 µL RNA酶（10 mg/ml），振荡混匀，于65℃水浴60-90 min；16000 g离心10 min； 取上清，加500 µL氯仿异戊醇，颠倒混匀30 s；16000 g离心10 min；取上清，加500 µL氯仿异戊醇，颠倒混匀30 s；16000 g离心5 min； 取上清，加2倍体积的沉淀缓冲液，颠倒混匀，室温放置60 min；16000 g离心10 min；弃上清，加350 µLNaCl溶液回溶；加500 µL氯仿异戊醇，颠倒混匀30 s；16000 g离心10 min； 取上清，加0.6倍体积的预冷的异丙醇，颠倒混匀，于-20 ℃放置30 min；16000 g离心10 min；弃上清，加500 µL 70%乙醇溶液，颠倒混匀清洗沉淀；16000 g离心10 min；弃上清，室温下风干后使用40 µL水回溶沉淀。 |
4楼2012-12-13 20:15:47
