应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » CTAB法提取DNA
201/1返回列表
查看: 3898  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

蓝慧

木虫 (正式写手)

[交流] CTAB法提取DNA

Sample Text
Sample Text
这是我用CTAB法提的DNA，虫友帮分析一下，为什么拖带这么厉害，图中已经用RNase消化过的。像这种的可以用来做后续PCR实验吗？

泳道1为2000的Marker,其他的为样品
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-07-12 10:40:35
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elbo

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
蓝慧(金币+1): 谢谢参与
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-07-12 21:52:46
降解了，不是RNA的问题。提取过程中注意点，后面3个样品的点样孔里面有残留蛋白，可能会抑制PCR反应，最好纯化一下，你也可以找个引物试试看能P出来不。
赞一下 回复此楼
2楼2012-07-12 10:50:43
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蓝慧

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by elbo at 2012-07-12 11:50:43
降解了，不是RNA的问题。提取过程中注意点，后面3个样品的点样孔里面有残留蛋白，可能会抑制PCR反应，最好纯化一下，你也可以找个引物试试看能P出来不。

那如何在提取过程中防止其降解呢？
赞一下 回复此楼
3楼2012-07-12 11:28:06
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

桃子老好吃

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
蓝慧(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-16 13:37:38
你提的是植物的还是细菌的DNA啊？我之前也是降解很厉害的，因为我的 TE配制出了问题，DNA在合适pH的TE缓冲液里面才比较稳定，你可以看看TE有没有配错。
赞一下 回复此楼
4楼2012-07-12 12:44:10
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蓝慧

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 桃子老好吃 at 2012-07-12 13:44:10
你提的是植物的还是细菌的DNA啊？我之前也是降解很厉害的，因为我的 TE配制出了问题，DNA在合适pH的TE缓冲液里面才比较稳定，你可以看看TE有没有配错。

我提的是植物的。TE是以前的，大概用了一年，那我再配个新的试一下
赞一下 回复此楼
5楼2012-07-12 12:56:34
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

太极拳

木虫 (小有名气)
★
蓝慧(金币+1): 谢谢参与
你这降解的不是一般的厉害！简直连主带都看不清了！认为是方法问题，或是试剂配置问题。我一般情况下，CTAB提取基因组，最后用ddH2O来溶解DNA
赞一下 回复此楼
6楼2012-07-12 16:38:34
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

coal@live.cn

新虫 (小有名气)
★
蓝慧(金币+1): 谢谢参与
降解好厉害啊，会不会材料本身就降解了？
赞一下 回复此楼
7楼2012-07-12 16:54:03
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elbo

金虫 (小有名气)
DNA在TE里面还是比较稳定的。8.0TE，
赞一下 回复此楼
8楼2012-07-12 19:19:54
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蓝慧

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by coal@live.cn at 2012-07-12 17:54:03
降解好厉害啊，会不会材料本身就降解了？

材料是刚取不久的，没理由啊，再说DNA不容易降解吧。
赞一下 回复此楼
9楼2012-07-12 20:10:38
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

coal@live.cn

新虫 (小有名气)
★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-16 13:38:05
引用回帖:
9楼: Originally posted by 蓝慧 at 2012-07-12 20:10:38
材料是刚取不久的，没理由啊，再说DNA不容易降解吧。...

有DNase在的话就极易降解，而DNase这种东西只要材料一出现伤口就会大量释放。

种子或茎杆倒还好，如果是叶片等幼嫩材料的话剪下就应该立即放入冰盒或者液氮中，然后奔回实验室丢-70℃冰箱的。
赞一下 回复此楼
10楼2012-07-12 20:42:55
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

霹雳光

至尊木虫 (著名写手)
★
蓝慧(金币+1): 谢谢参与
我也是刚学的，顺便学习一下
赞一下 回复此楼
11楼2012-07-12 21:14:38
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蓝慧

木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by coal@live.cn at 2012-07-12 21:42:55
有DNase在的话就极易降解，而DNase这种东西只要材料一出现伤口就会大量释放。

种子或茎杆倒还好，如果是叶片等幼嫩材料的话剪下就应该立即放入冰盒或者液氮中，然后奔回实验室丢-70℃冰箱的。...

我取下后，就用液氮冻过了，之后一直放在-80℃冰箱
赞一下 回复此楼
12楼2012-07-12 22:41:16
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

嘻哈武士

新虫 (初入文坛)
学习了
回复此楼
13楼2012-07-13 09:59:07
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

coal@live.cn

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-13 16:13:54
引用回帖:
12楼: Originally posted by 蓝慧 at 2012-07-12 22:41:16
我取下后，就用液氮冻过了，之后一直放在-80℃冰箱...

不是冻过就行的，在丢冰箱前如果解冻那就没意义了。

如果取材没问题的话，那就是研磨时出问题了。研磨时同时也要注意不要让材料解冻，研磨完后就迅速将冷冻状态的粉末转移至预热的CTAB中，因为CTAB提取液中的EDTA和巯基乙醇都能抑制DNase，所以从这步开始基本不用担心降解了。

如果前面几步都正确但还是降解，那就只能是你操作过程中产生的强烈的机械剪切，包括使用涡旋仪、用枪头反复吹吸、丝状沉淀出现后还剧烈振荡等。
赞一下 回复此楼
14楼2012-07-13 10:18:59
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蓝慧

木虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by coal@live.cn at 2012-07-13 11:18:59
不是冻过就行的，在丢冰箱前如果解冻那就没意义了。

如果取材没问题的话，那就是研磨时出问题了。研磨时同时也要注意不要让材料解冻，研磨完后就迅速将冷冻状态的粉末转移至预热的CTAB中，因为CTAB提取液中的ED ...

谢谢，我再试一下。多谢你的意见！
赞一下 回复此楼
15楼2012-07-13 11:17:51
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

charlen520

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我提取的没有怎么降解呀
赞一下 回复此楼
16楼2012-07-15 10:19:51
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jl860822

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你的样品放的时间很长吗？RNase消化多长时间？植物组织的DNA没提过，以前用CTAB做过动物的，感觉这种方法很好使
赞一下 回复此楼
17楼2012-07-15 12:25:47
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蓝慧

木虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-15 13:25:47
你的样品放的时间很长吗？RNase消化多长时间？植物组织的DNA没提过，以前用CTAB做过动物的，感觉这种方法很好使

放不多正好一个月，RNase消化20分钟
赞一下 回复此楼
18楼2012-07-15 14:48:19
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jl860822

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
18楼: Originally posted by 蓝慧 at 2012-07-15 14:48:19
放不多正好一个月，RNase消化20分钟...

一个月的话，应该没啥问题的，RNase消化也差不多，按道理i讲，应该不会出现降解这么厉害，我觉得你是不是换一下其他的试剂，看看有哪些试剂可能会出问题
赞一下 回复此楼
19楼2012-07-15 21:51:36
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蓝慧

木虫 (正式写手)
引用回帖:
19楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-15 22:51:36
一个月的话，应该没啥问题的，RNase消化也差不多，按道理i讲，应该不会出现降解这么厉害，我觉得你是不是换一下其他的试剂，看看有哪些试剂可能会出问题...

谢谢建议！我试一下
赞一下 回复此楼
20楼2012-07-15 21:55:45
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zenghuilan 的主题更新
201/1返回列表
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 号外号外 +11 GZUZM 2026-08-24 11/550 2026-08-24 19:48 by 当个好老师
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤？
[基金申请] 人气不行了 +9 fansofjerry 2026-08-21 9/450 2026-08-24 17:48 by zhaozhengxin
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +5 scalable 2026-08-24 5/250 2026-08-24 17:03 by spiderzhuzhi
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +6 炎黄贵胄 2026-08-22 7/350 2026-08-24 11:58 by 6543yes
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 科研孤儿太难了 +18 我4大白菜 2026-08-20 19/950 2026-08-24 09:47 by 凯恩广盛催化分�
[基金申请] 什么时候开奖？ +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭