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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » CTAB法提取DNA
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蓝慧

木虫 (正式写手)

[交流] CTAB法提取DNA

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这是我用CTAB法提的DNA，虫友帮分析一下，为什么拖带这么厉害，图中已经用RNase消化过的。像这种的可以用来做后续PCR实验吗？

泳道1为2000的Marker,其他的为样品
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1楼 2012-07-12 10:40:35
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coal@live.cn

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-13 16:13:54
引用回帖:
12楼: Originally posted by 蓝慧 at 2012-07-12 22:41:16
我取下后，就用液氮冻过了，之后一直放在-80℃冰箱...

不是冻过就行的，在丢冰箱前如果解冻那就没意义了。

如果取材没问题的话，那就是研磨时出问题了。研磨时同时也要注意不要让材料解冻，研磨完后就迅速将冷冻状态的粉末转移至预热的CTAB中，因为CTAB提取液中的EDTA和巯基乙醇都能抑制DNase，所以从这步开始基本不用担心降解了。

如果前面几步都正确但还是降解，那就只能是你操作过程中产生的强烈的机械剪切，包括使用涡旋仪、用枪头反复吹吸、丝状沉淀出现后还剧烈振荡等。
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14楼2012-07-13 10:18:59
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elbo

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
蓝慧(金币+1): 谢谢参与
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-07-12 21:52:46
降解了，不是RNA的问题。提取过程中注意点，后面3个样品的点样孔里面有残留蛋白，可能会抑制PCR反应，最好纯化一下，你也可以找个引物试试看能P出来不。
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2楼2012-07-12 10:50:43
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蓝慧

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by elbo at 2012-07-12 11:50:43
降解了，不是RNA的问题。提取过程中注意点，后面3个样品的点样孔里面有残留蛋白，可能会抑制PCR反应，最好纯化一下，你也可以找个引物试试看能P出来不。

那如何在提取过程中防止其降解呢？
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3楼2012-07-12 11:28:06
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桃子老好吃

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
蓝慧(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-16 13:37:38
你提的是植物的还是细菌的DNA啊？我之前也是降解很厉害的，因为我的 TE配制出了问题，DNA在合适pH的TE缓冲液里面才比较稳定，你可以看看TE有没有配错。
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4楼2012-07-12 12:44:10
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