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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DNA的提取和纯化
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崔永霞

铁虫 (小有名气)

[求助] DNA的提取和纯化

各位高手我最近在提DNA，刚刚接触，大家有没有人知道DNA提取过程中的PVP和tris-饱和酚的作用是什么啊，可不可以给我说一说啊？
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每个人都有心底最柔软的地方，请不要触碰它，因为每个人都有自己的尊严！
1楼2013-07-12 08:50:40
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电电的开始

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
崔永霞: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-07-12 16:19:40
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-07-13 15:23:30
Tris饱和酚一般PH大于7.8，用于DNA的提取。其中，酚是强的蛋白变性剂，可以使细胞或组织中的蛋白质变性析出。而Tris的主要作用是防治止酚类氧化，若酚类氧化，则会形成醌（两个苯环），醌含有强自由基，会破坏核酸结构,Tris-HCl (pH8.0)提供一个缓冲环境,防止核酸被破坏。 同时，由于PH值大于7，在碱性环境中DNA处于水相，RNA处于有机相。从而分离上清，即可得到DNA。
PVPPVP(聚乙烯吡咯烷酮)是酚的络合物,能与多酚形成一种不溶的络合物质,有效去除多酚,减少DNA中酚的污染;同时它也能和多糖结合,有效去除多糖.
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为自己而开始
3楼2013-07-12 11:30:36
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hyc_charles

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
崔永霞: 金币+2, ★★★很有帮助, 太感谢了！ 2013-07-13 11:48:27
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-07-13 15:23:39
PVP是酚类化合物的螯合剂，可与多酚化合物形成复合体的，使其不被氧化成醌类，可以有效的防止多酚化合物与RNA的结合，提高RNA的完整性。
而tris-饱和酚的作用主要是使蛋白质变性并使抽提液分相，促进水相中的蛋白与DNA向有机相的分配，离心后从而最大限度的去除细胞碎片和大部分蛋白质。
希望对你有用，这都是自己的笔记
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不但要做一个优秀的人，更要做一个无可取代的人…
6楼2013-07-12 17:31:32
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hyc_charles

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
崔永霞: 金币+2, ★★★很有帮助, 非常感谢！ 2013-07-13 11:51:00
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-07-13 15:23:46
引用回帖:
5楼: Originally posted by 崔永霞 at 2013-07-12 16:19:28
首先谢谢你的详细讲解，那DNA提取的时候可不可以同时都加PVP和Tris饱和酚？如果可以的话，那pvp是用来去除酚类物质的，再加Tris饱和酚，岂不是又加入了酚类物质，这不是互相矛盾？！...

PVP的用途主要是在配置CTAB时用的，你使用改良的CTAB法提取DNA的嘛？
CTAB 提取液（PH 8.0）的配方如下：称取CTAB 2 g，PVP 2 g，加蒸馏水40ml，加1M Tris-cl（PH8.0）10ml，0.5M EDTA（PH 8.0）4ml和5M NaCl 28ml,待CTAB溶解后用蒸馏水定容到100ml（提取前加入2%的巯基乙醇，100ml加0.2ml巯基乙醇）
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7楼2013-07-12 17:37:29
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普通回帖

oranzxc

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
崔永霞(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-07-12 10:48:55
崔永霞: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-07-12 16:20:28
酚是使蛋白变性并抽提蛋白的，还能使DNase丧失功能
PVP是抽提多糖和多酚的，包括植物本身还有的酚类
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2楼2013-07-12 10:32:38
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御风（远）

新虫 (初入文坛)
如3楼所述，
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4楼2013-07-12 15:34:53
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崔永霞

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by oranzxc at 2013-07-12 10:32:38
酚是使蛋白变性并抽提蛋白的，还能使DNase丧失功能
PVP是抽提多糖和多酚的，包括植物本身还有的酚类

首先谢谢你的详细讲解，那DNA提取的时候可不可以同时都加PVP和Tris饱和酚？如果可以的话，那pvp是用来去除酚类物质的，再加Tris饱和酚，岂不是又加入了酚类物质，这不是互相矛盾？！
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5楼2013-07-12 16:19:28
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崔永霞

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by hyc_charles at 2013-07-12 17:37:29
PVP的用途主要是在配置CTAB时用的，你使用改良的CTAB法提取DNA的嘛？
CTAB 提取液（PH 8.0）的配方如下：称取CTAB 2 g，PVP 2 g，加蒸馏水40ml，加1M Tris-cl（PH8.0）10ml，0.5M EDTA（PH 8.0）4ml和5M NaCl 28m ...

弱弱的问一句，CTAB 提取液（PH 8.0）的配方不是就是加1M Tris-cl（PH8.0）10ml，0.5M EDTA（PH 8.0）4ml和5M NaCl 28ml然后定容到100ml吗？怎么还会有CTAB2g呢？
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每个人都有心底最柔软的地方，请不要触碰它，因为每个人都有自己的尊严！
8楼2013-07-13 11:56:28
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崔永霞

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by hyc_charles at 2013-07-12 17:37:29
PVP的用途主要是在配置CTAB时用的，你使用改良的CTAB法提取DNA的嘛？
CTAB 提取液（PH 8.0）的配方如下：称取CTAB 2 g，PVP 2 g，加蒸馏水40ml，加1M Tris-cl（PH8.0）10ml，0.5M EDTA（PH 8.0）4ml和5M NaCl 28m ...

再问一句，抽提的时候用的是25:24：1还是24:1？因为我是在想PVP是除酚类物质的，再加tris饱和酚的话是不是有点矛盾呢？
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9楼2013-07-13 12:22:53
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hyc_charles

金虫 (小有名气)

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★ ★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-07-13 15:23:57
崔永霞: 金币+1, ★★★很有帮助, 非常感谢！ 2013-07-13 15:26:00
引用回帖:
9楼: Originally posted by 崔永霞 at 2013-07-13 12:22:53
再问一句，抽提的时候用的是25:24：1还是24:1？因为我是在想PVP是除酚类物质的，再加tris饱和酚的话是不是有点矛盾呢？...

酚：氯仿：异戊醇=25：24：1，三者的比例就是这样，一般第一次加酚，其余抽提只用氯仿和异戊醇，这样可以把酚除掉

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10楼2013-07-13 15:11:16
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