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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】DNA提取纯化
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lhwen182

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】DNA提取纯化

提取总DNA时，最后沉淀的DNA时可以用异丙醇室温沉淀一小时，也可以用预冷的乙醇沉淀，请问两种方法那个比较好啊？
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1楼 2011-03-02 16:35:02
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hitliutao

银虫 (小有名气)
★
lhwen182(金币+1):谢谢参与
基本都一样,没什么区别
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2楼2011-03-02 16:51:20
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wuw579

铁杆木虫 (正式写手)
★
lhwen182(金币+1):谢谢参与
预冷的乙醇
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4楼2011-03-02 16:58:19
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zhengfan1109

银虫 (正式写手)
★
lhwen182(金币+1):谢谢参与
我们用预冷的乙醇沉淀。
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5楼2011-03-02 18:25:34
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wqj1988926

金虫 (正式写手)
★
lhwen182(金币+1):谢谢参与
用乙醇，比较好，异丙醇在提rna的时候用比较好
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6楼2011-03-02 21:20:54
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)
★
lhwen182(金币+1):谢谢参与
用预冷的异丙醇
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7楼2011-03-02 21:33:00
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
lhwen182(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+2): 正解~~~ 2011-03-03 11:25:07
楼上各位………………咳咳…………

异丙醇的沉淀能力比乙醇更强，然而挥发性差
这就是为什么通常protocol都会在后面加一步乙醇沉淀洗涤

同时，这个乙醇也是含有一部分水的，可以进一步洗掉一些可溶性的杂质，异丙醇的沉淀作用是非特异的

然而为什么不直接乙醇沉淀算了呢，因为乙醇沉淀DNA能力弱~~不好富集~到时候得率会杯具，除非花多点时间沉淀~~

另外沉淀也不用这么久，异丙醇15min~30min足够了
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8楼2011-03-02 23:33:38
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-03-02 23:33:38:
楼上各位………………咳咳…………

异丙醇的沉淀能力比乙醇更强，然而挥发性差
这就是为什么通常protocol都会在后面加一步乙醇沉淀洗涤

同时，这个乙醇也是含有一部分水的，可以进一步洗掉一些可溶性的杂质 ...

对啊，异丙醇沉淀完之后，还是要用乙醇洗涤的
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9楼2011-03-03 11:25:45
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clare420

新虫 (小有名气)
★
lhwen182(金币+1):谢谢参与
乙醇可以除掉之前的一些有机试剂，但是沉淀下来的小羽毛很容易碎，异丙醇沉淀的实一点，但是有非特异
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10楼2011-03-04 16:50:05
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天使托

专家顾问 (职业作家)
★
lhwen182(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-03-02 23:33:38:
楼上各位………………咳咳…………

异丙醇的沉淀能力比乙醇更强，然而挥发性差
这就是为什么通常protocol都会在后面加一步乙醇沉淀洗涤

同时，这个乙醇也是含有一部分水的，可以进一步洗掉一些可溶性的杂质 ...

那为什么试剂盒都会在后面几步沉淀DNA的时候用乙醇呢？
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11楼2011-03-04 17:50:43
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-03-04 17:50:43:
那为什么试剂盒都会在后面几步沉淀DNA的时候用乙醇呢？

最后一步用乙醇，因为很好挥发~~
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12楼2011-03-04 19:35:53
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)
★
lhwen182(金币+1):谢谢参与
我也一直用乙醇沉淀，但是需要的量比较多，大约是2-2.5倍
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13楼2011-03-05 15:21:57
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diaoyuhua

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
遇冷的乙醇好点，尽量减少DNA降解
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14楼2011-03-05 19:28:49
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笑口常开@

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我在这给问题上也就纠结过，都是高人啊，以后小女子有问题希望大家也能多给建议。
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15楼2011-03-06 21:26:50
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ansion851014

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我记得我们中间还用过无水乙醇，然后最后用70%乙醇
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16楼2011-03-07 10:21:16
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冰鱼儿

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-03-02 23:33:38:
楼上各位………………咳咳…………

异丙醇的沉淀能力比乙醇更强，然而挥发性差
这就是为什么通常protocol都会在后面加一步乙醇沉淀洗涤

同时，这个乙醇也是含有一部分水的，可以进一步洗掉一些可溶性的杂质 ...

乙醇指的是无水乙醇么？
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17楼2011-03-07 14:42:03
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 冰鱼儿 at 2011-03-07 14:42:03:
乙醇指的是无水乙醇么？

70%~80%的EtOH，一般不用无水
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18楼2011-03-07 14:58:27
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惟我独尊

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以用预冷的异丙醇在-20°C冰箱里沉淀较长时间 这样效果比较好
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20楼2011-03-07 15:15:19
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dingxiuying

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
经常用预冷的无水乙醇沉淀。
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21楼2011-03-07 15:50:02
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yanzijiayou

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我通常都是用异丙醇沉淀，然后冰上放置15min，效果不错
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22楼2011-03-08 10:05:19
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luhaitao84

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-03-02 23:33:38:
楼上各位………………咳咳…………

异丙醇的沉淀能力比乙醇更强，然而挥发性差
这就是为什么通常protocol都会在后面加一步乙醇沉淀洗涤

同时，这个乙醇也是含有一部分水的，可以进一步洗掉一些可溶性的杂质 ...

正解。。。
通常都是异丙醇先沉淀 后用乙醇清洗的
觉得最好是30分钟
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23楼2011-03-08 10:20:34
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yuruoyuxue

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
异丙醇的好一些，记得以前看哪本实验书上说，异丙醇沉淀的DNA杂质较少。
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24楼2011-03-08 10:50:31
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wang_zhen

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
16楼: Originally posted by ansion851014 at 2011-03-07 10:21:16
我记得我们中间还用过无水乙醇，然后最后用70%乙醇

请问，先用无水乙醇沉淀的时候，是用预冷的乙醇沉淀吗？能不能告诉我一下详细的步骤呢，谢谢谢谢
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25楼2013-06-19 12:25:45
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飘零燕阳阳3楼
2011-03-02 16:55   回复  
lhwen182(金币+1):谢谢参与
小小198219楼
2011-03-07 14:59   回复  
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
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