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lhwen182

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[交流] 【求助/交流】DNA提取纯化

提取总DNA时，最后沉淀的DNA时可以用异丙醇室温沉淀一小时，也可以用预冷的乙醇沉淀，请问两种方法那个比较好啊？

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1楼 2011-03-02 16:35:02

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hitliutao

银虫 (小有名气)

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★
lhwen182(金币+1):谢谢参与

基本都一样,没什么区别

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2楼2011-03-02 16:51:20

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wuw579

铁杆木虫 (正式写手)

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★
lhwen182(金币+1):谢谢参与

预冷的乙醇

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4楼2011-03-02 16:58:19

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zhengfan1109

银虫 (正式写手)

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★
lhwen182(金币+1):谢谢参与

我们用预冷的乙醇沉淀。

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5楼2011-03-02 18:25:34

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wqj1988926

金虫 (正式写手)

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★
lhwen182(金币+1):谢谢参与

用乙醇，比较好，异丙醇在提rna的时候用比较好

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6楼2011-03-02 21:20:54

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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)

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★
lhwen182(金币+1):谢谢参与

用预冷的异丙醇

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7楼2011-03-02 21:33:00

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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★
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rainwander(金币+2): 正解~~~ 2011-03-03 11:25:07

楼上各位………………咳咳…………

异丙醇的沉淀能力比乙醇更强，然而挥发性差
这就是为什么通常protocol都会在后面加一步乙醇沉淀洗涤

同时，这个乙醇也是含有一部分水的，可以进一步洗掉一些可溶性的杂质，异丙醇的沉淀作用是非特异的

然而为什么不直接乙醇沉淀算了呢，因为乙醇沉淀DNA能力弱~~不好富集~到时候得率会杯具，除非花多点时间沉淀~~

另外沉淀也不用这么久，异丙醇15min~30min足够了

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8楼2011-03-02 23:33:38

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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)

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引用回帖:

Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-03-02 23:33:38:
楼上各位………………咳咳…………

异丙醇的沉淀能力比乙醇更强，然而挥发性差
这就是为什么通常protocol都会在后面加一步乙醇沉淀洗涤

同时，这个乙醇也是含有一部分水的，可以进一步洗掉一些可溶性的杂质 ...

对啊，异丙醇沉淀完之后，还是要用乙醇洗涤的

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9楼2011-03-03 11:25:45

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clare420

新虫 (小有名气)

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★
lhwen182(金币+1):谢谢参与

乙醇可以除掉之前的一些有机试剂，但是沉淀下来的小羽毛很容易碎，异丙醇沉淀的实一点，但是有非特异

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10楼2011-03-04 16:50:05

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天使托

专家顾问 (职业作家)

★
lhwen182(金币+1):谢谢参与

引用回帖:

那为什么试剂盒都会在后面几步沉淀DNA的时候用乙醇呢？

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11楼2011-03-04 17:50:43

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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:

Originally posted by 天使托 at 2011-03-04 17:50:43:
那为什么试剂盒都会在后面几步沉淀DNA的时候用乙醇呢？

最后一步用乙醇，因为很好挥发~~

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12楼2011-03-04 19:35:53

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zhangxn2010

木虫 (著名写手)

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★
lhwen182(金币+1):谢谢参与

我也一直用乙醇沉淀，但是需要的量比较多，大约是2-2.5倍

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13楼2011-03-05 15:21:57

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diaoyuhua

金虫 (小有名气)

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★
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遇冷的乙醇好点，尽量减少DNA降解

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14楼2011-03-05 19:28:49

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笑口常开@

新虫 (初入文坛)

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★
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我在这给问题上也就纠结过，都是高人啊，以后小女子有问题希望大家也能多给建议。

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15楼2011-03-06 21:26:50

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ansion851014

新虫 (小有名气)

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★
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我记得我们中间还用过无水乙醇，然后最后用70%乙醇

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16楼2011-03-07 10:21:16

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冰鱼儿

金虫 (正式写手)

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★
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引用回帖:

乙醇指的是无水乙醇么？

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17楼2011-03-07 14:42:03

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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★
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引用回帖:

Originally posted by 冰鱼儿 at 2011-03-07 14:42:03:
乙醇指的是无水乙醇么？

70%~80%的EtOH，一般不用无水

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18楼2011-03-07 14:58:27

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惟我独尊

金虫 (小有名气)

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★
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可以用预冷的异丙醇在-20°C冰箱里沉淀较长时间这样效果比较好

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20楼2011-03-07 15:15:19

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dingxiuying

木虫 (正式写手)

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★
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经常用预冷的无水乙醇沉淀。

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21楼2011-03-07 15:50:02

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yanzijiayou

新虫 (初入文坛)

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★
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我通常都是用异丙醇沉淀，然后冰上放置15min，效果不错

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22楼2011-03-08 10:05:19

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luhaitao84

至尊木虫 (著名写手)

★
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引用回帖:

正解。。。
通常都是异丙醇先沉淀后用乙醇清洗的
觉得最好是30分钟

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23楼2011-03-08 10:20:34

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yuruoyuxue

木虫 (正式写手)

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★
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异丙醇的好一些，记得以前看哪本实验书上说，异丙醇沉淀的DNA杂质较少。

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24楼2011-03-08 10:50:31

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wang_zhen

铜虫 (小有名气)

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★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

引用回帖:

16楼: Originally posted by ansion851014 at 2011-03-07 10:21:16
我记得我们中间还用过无水乙醇，然后最后用70%乙醇

请问，先用无水乙醇沉淀的时候，是用预冷的乙醇沉淀吗？能不能告诉我一下详细的步骤呢，谢谢谢谢

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25楼2013-06-19 12:25:45

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简单回复

飘零燕阳阳3楼

2011-03-02 16:55 回复

lhwen182(金币+1):谢谢参与

小小198219楼

2011-03-07 14:59 回复

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