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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取艾美尔球虫DNA的方法
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萌主李萌萌

铜虫 (初入文坛)

[求助] 提取艾美尔球虫DNA的方法

我是按照师姐提取东北虎源球虫DNA的的方法来提取艾美尔球虫的DNA的，可一直P不出来，各位虫友帮忙看看这个过程里有什么细节需要补充的么？特别是我标红的。我是第一次做，没人指导啊~
①将保存的卵囊液一80℃一室温反复冻融三次后(一80℃、室温每次各20min)，加入485μ裂解液TES，15μ(20mg/ml)蛋白酶K37℃消化过夜。
②用酚、氯仿抽提，即加入500μ酚混匀（可以用漩涡振荡器么？）静置10min，12000r/min离心15min。
③取上清，再加入酚一氯仿各250μ，（这里不加异戊醇也可以么？）12000r/min离心15min，最后加入500μ氯仿，12000r离心15min，取上清。
④沉降（沉降多长时间？），加入无水乙醇iml，一20℃沉降20min后，12000r/min离心20min，弃上清。
⑤加入75%乙醇1ml，溶解沉淀，12000r/mln离心5min，弃上清(这里的上清根本看不出来)。
⑥倒置用滤纸干燥。
⑦加入30μ溶解沉淀，一20℃保存备用。
如果有哪位同行提取过艾美尔球虫的基因组DNA，也可以给个更详细的方案，多谢啦~！
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互相学习，共同进步
1楼 2012-08-30 15:22:33
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zdfang83

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 金币+1, 鼓励 2012-08-31 07:28:12
我以前都是把纯化的卵囊不经反复冻融直接用组织研磨机打碎了，然后用TAKARA的通用基因组提取试剂盒照操作步骤来就行了，后来用其他试剂盒也很容易就提取出来了。
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2楼2012-08-30 22:18:44
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萌主李萌萌

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zdfang83 at 2012-08-30 22:18:44
我以前都是把纯化的卵囊不经反复冻融直接用组织研磨机打碎了，然后用TAKARA的通用基因组提取试剂盒照操作步骤来就行了，后来用其他试剂盒也很容易就提取出来了。

我们实验室没有组织研磨器。。。而且我不太明白量那么少能研磨吗？我冻融，超声都试过，之后的提取用过原平皓的试剂盒，也用过手工，效果都不好啊
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互相学习，共同进步
3楼2012-08-31 14:13:58
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萌主李萌萌

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zdfang83 at 2012-08-30 22:18:44
我以前都是把纯化的卵囊不经反复冻融直接用组织研磨机打碎了，然后用TAKARA的通用基因组提取试剂盒照操作步骤来就行了，后来用其他试剂盒也很容易就提取出来了。

我们实验室没有组织研磨器。。。而且我不太明白量那么少能研磨吗？我冻融，超声都试过，之后的提取用过原平皓的试剂盒，也用过手工，效果都不好啊
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互相学习，共同进步
4楼2012-08-31 14:16:48
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leexiaoyao

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
萌主李萌萌: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-09-01 10:29:58
引用回帖:
3楼: Originally posted by 萌主李萌萌 at 2012-08-31 14:13:58
我们实验室没有组织研磨器。。。而且我不太明白量那么少能研磨吗？我冻融，超声都试过，之后的提取用过原平皓的试剂盒，也用过手工，效果都不好啊...

可以的 有的冷冻研磨机就是用于量少时研磨的
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天生我材必有用
5楼2012-08-31 16:33:04
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zdfang83

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 萌主李萌萌 at 2012-08-31 14:16:48
我们实验室没有组织研磨器。。。而且我不太明白量那么少能研磨吗？我冻融，超声都试过，之后的提取用过原平皓的试剂盒，也用过手工，效果都不好啊...

你取大量卵囊用饱和食盐水漂浮纯化一下，没有组织研磨机就用2ml的玻璃的组织匀浆器研磨半个小时，再根据基因组提取试剂盒说明书参照细胞DNA提取方法来提，应该没问题的，我之前也是这样做的，很容易就提出来了。玻璃的组织匀浆器在学校卖玻璃仪器的部门应该有的，实在没有就跟耗材公司买几个，很便宜的，买十个也用不了多少钱。
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6楼2012-08-31 20:08:31
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lxl198012

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

针对少量样品处理的，鼎昊源科技有限公司近期推出的TL2010S，专用提取DNA，如果你的样品，现在还存在这种问题，建议你使用DHS的TL2010S进行冷冻样品处理
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7楼2013-01-30 13:28:44
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YOYO1101

新虫 (初入文坛)
我现在也在提取艾美尔球虫的DNA，不知道你还关注小木虫没，能不能请教下你的实验方法
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8楼2016-02-24 10:44:31
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