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提取艾美尔球虫DNA的方法
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我是按照师姐提取东北虎源球虫DNA的的方法来提取艾美尔球虫的DNA的，可一直P不出来，各位虫友帮忙看看这个过程里有什么细节需要补充的么？特别是我标红的。我是第一次做，没人指导啊~ ①将保存的卵囊液一80℃一室温反复冻融三次后(一80℃、室温每次各20min)，加入485μ裂解液TES，15μ(20mg/ml)蛋白酶K37℃消化过夜。 ②用酚、氯仿抽提，即加入500μ酚混匀（可以用漩涡振荡器么？）静置10min，12000r/min离心15min。 ③取上清，再加入酚一氯仿各250μ，（这里不加异戊醇也可以么？）12000r/min离心15min，最后加入500μ氯仿，12000r离心15min，取上清。 ④沉降（沉降多长时间？），加入无水乙醇iml，一20℃沉降20min后，12000r/min离心20min，弃上清。 ⑤加入75%乙醇1ml，溶解沉淀，12000r/mln离心5min，弃上清(这里的上清根本看不出来)。 ⑥倒置用滤纸干燥。 ⑦加入30μ溶解沉淀，一20℃保存备用。 如果有哪位同行提取过艾美尔球虫的基因组DNA，也可以给个更详细的方案，多谢啦~！ |
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5楼2012-08-31 16:33:04