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【求助】石蜡组织标本中提取DNA方法
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最近按照试剂盒中步骤提取石蜡组织中的DNA,但一直提不出。觉得问题应该出在脱蜡步骤上。 请问大虾们,用二甲苯脱蜡应该注意什么?如何判断石蜡已经脱干净,可以进行无水乙醇洗涤了?乙醇洗涤后时候可以直接消化?还是在消化前需要其他步骤? 关键时刻请拉战友一把,感激不尽! |
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yuezhixian(金币+5): 灰常感谢! 2011-04-15 17:10:26
lstt09nk(金币+6): 辛苦 2011-05-14 09:28:53
yuezhixian(金币+5): 灰常感谢! 2011-04-15 17:10:26
lstt09nk(金币+6): 辛苦 2011-05-14 09:28:53
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呃...LZ你做的是石蜡块,还是石蜡切片提取DNA? 有条件的话,我建议做成10~15um的石蜡切片后再提取,这样效果较好。如果是石蜡块且形状较大,那么脱蜡时间要相应延长,最好能够50℃温育半小时左右。 至于如何判断石蜡是否已经除净...这个,我没什么好办法,就是肉眼观察。不过我通常是用二甲苯重复处理两次,之后再用乙醇清洗。 乙醇清洗完之后自然干燥,如果是切片的话就可以直接裂解液消化了,如果是较大的组织块,需要加入裂解液后用匀浆器打碎,之后再恒温孵育若干时间。 最后提一点,二甲苯有毒,如果需要经常提取的话,建议用右旋柠檬烯(D-limonene)代替,效果很好,气味芳香,无毒无害~ ![]() [ Last edited by holyala on 2011-4-15 at 10:07 ] |
2楼2011-04-15 10:04:34
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