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yuezhixian

铜虫 (初入文坛)


[交流] 【求助】石蜡组织标本中提取DNA方法

最近按照试剂盒中步骤提取石蜡组织中的DNA,但一直提不出。觉得问题应该出在脱蜡步骤上。
请问大虾们,用二甲苯脱蜡应该注意什么?如何判断石蜡已经脱干净,可以进行无水乙醇洗涤了?乙醇洗涤后时候可以直接消化?还是在消化前需要其他步骤?

关键时刻请拉战友一把,感激不尽!
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holyala

木虫 (著名写手)


★ ★ ★ ★ ★ ★
yuezhixian(金币+5): 灰常感谢! 2011-04-15 17:10:26
lstt09nk(金币+6): 辛苦 2011-05-14 09:28:53
呃...LZ你做的是石蜡块,还是石蜡切片提取DNA?
有条件的话,我建议做成10~15um的石蜡切片后再提取,这样效果较好。如果是石蜡块且形状较大,那么脱蜡时间要相应延长,最好能够50℃温育半小时左右。
至于如何判断石蜡是否已经除净...这个,我没什么好办法,就是肉眼观察。不过我通常是用二甲苯重复处理两次,之后再用乙醇清洗。
乙醇清洗完之后自然干燥,如果是切片的话就可以直接裂解液消化了,如果是较大的组织块,需要加入裂解液后用匀浆器打碎,之后再恒温孵育若干时间。
最后提一点,二甲苯有毒,如果需要经常提取的话,建议用右旋柠檬烯(D-limonene)代替,效果很好,气味芳香,无毒无害~

[ Last edited by holyala on 2011-4-15 at 10:07 ]
2楼2011-04-15 10:04:34
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yangsener032

金虫 (正式写手)


★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-05-14 09:30:37
额。。。。。。
石蜡组织中的组织块是经过甲醛浸泡处理过的吧?貌似甲醛会破坏DNA,所以少有提得出来的呢。我有一个同学做的就是这个相关的。不过我不是很清楚这些之间有没有必然的联系。
3楼2011-04-17 09:29:17
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skywalkerelf

银虫 (小有名气)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
Qiagen有一款试剂盒可以提取蜡块组织的DNA,试试吧,我们这有人用!还不错的说哦!
4楼2011-05-13 14:52:25
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Explor

新虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
BIOG石蜡包埋组织DNA抽提试剂盒无需过夜温育即可从福尔马林固定的、石蜡包埋组织中高效纯化基因组DNA,可以一试。
5楼2019-12-06 10:48:21
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