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[交流]
【求助】石蜡组织标本中提取DNA方法
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最近按照试剂盒中步骤提取石蜡组织中的DNA，但一直提不出。觉得问题应该出在脱蜡步骤上。 请问大虾们，用二甲苯脱蜡应该注意什么？如何判断石蜡已经脱干净，可以进行无水乙醇洗涤了？乙醇洗涤后时候可以直接消化？还是在消化前需要其他步骤？ 关键时刻请拉战友一把，感激不尽！ |
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5楼2019-12-06 10:48:21
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yuezhixian(金币+5): 灰常感谢！ 2011-04-15 17:10:26
lstt09nk(金币+6): 辛苦 2011-05-14 09:28:53
yuezhixian(金币+5): 灰常感谢！ 2011-04-15 17:10:26
lstt09nk(金币+6): 辛苦 2011-05-14 09:28:53
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呃...LZ你做的是石蜡块，还是石蜡切片提取DNA？ 有条件的话，我建议做成10~15um的石蜡切片后再提取，这样效果较好。如果是石蜡块且形状较大，那么脱蜡时间要相应延长，最好能够50℃温育半小时左右。 至于如何判断石蜡是否已经除净...这个，我没什么好办法，就是肉眼观察。不过我通常是用二甲苯重复处理两次，之后再用乙醇清洗。 乙醇清洗完之后自然干燥，如果是切片的话就可以直接裂解液消化了，如果是较大的组织块，需要加入裂解液后用匀浆器打碎，之后再恒温孵育若干时间。 最后提一点，二甲苯有毒，如果需要经常提取的话，建议用右旋柠檬烯（D-limonene）代替，效果很好，气味芳香，无毒无害~  [ Last edited by holyala on 2011-4-15 at 10:07 ] |
2楼2011-04-15 10:04:34
3楼2011-04-17 09:29:17
4楼2011-05-13 14:52:25
