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yuezhixian

铜虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助】石蜡组织标本中提取DNA方法

最近按照试剂盒中步骤提取石蜡组织中的DNA，但一直提不出。觉得问题应该出在脱蜡步骤上。
请问大虾们，用二甲苯脱蜡应该注意什么？如何判断石蜡已经脱干净，可以进行无水乙醇洗涤了？乙醇洗涤后时候可以直接消化？还是在消化前需要其他步骤？

关键时刻请拉战友一把，感激不尽！

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1楼 2011-04-14 23:19:48

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yangsener032

金虫 (正式写手)

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★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-05-14 09:30:37

额。。。。。。
石蜡组织中的组织块是经过甲醛浸泡处理过的吧？貌似甲醛会破坏DNA，所以少有提得出来的呢。我有一个同学做的就是这个相关的。不过我不是很清楚这些之间有没有必然的联系。

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3楼2011-04-17 09:29:17

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holyala

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★
yuezhixian(金币+5): 灰常感谢！ 2011-04-15 17:10:26
lstt09nk(金币+6): 辛苦 2011-05-14 09:28:53

呃...LZ你做的是石蜡块，还是石蜡切片提取DNA？
有条件的话，我建议做成10~15um的石蜡切片后再提取，这样效果较好。如果是石蜡块且形状较大，那么脱蜡时间要相应延长，最好能够50℃温育半小时左右。
至于如何判断石蜡是否已经除净...这个，我没什么好办法，就是肉眼观察。不过我通常是用二甲苯重复处理两次，之后再用乙醇清洗。
乙醇清洗完之后自然干燥，如果是切片的话就可以直接裂解液消化了，如果是较大的组织块，需要加入裂解液后用匀浆器打碎，之后再恒温孵育若干时间。
最后提一点，二甲苯有毒，如果需要经常提取的话，建议用右旋柠檬烯（D-limonene）代替，效果很好，气味芳香，无毒无害~