应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取艾美尔球虫DNA的方法
51/1返回列表
查看: 1730  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

萌主李萌萌

铜虫 (初入文坛)

[求助] 提取艾美尔球虫DNA的方法

我是按照师姐提取东北虎源球虫DNA的的方法来提取艾美尔球虫的DNA的，可一直P不出来，各位虫友帮忙看看这个过程里有什么细节需要补充的么？特别是我标红的。我是第一次做，没人指导啊~
①将保存的卵囊液一80℃一室温反复冻融三次后(一80℃、室温每次各20min)，加入485μ裂解液TES，15μ(20mg/ml)蛋白酶K37℃消化过夜。
②用酚、氯仿抽提，即加入500μ酚混匀（可以用漩涡振荡器么？）静置10min，12000r/min离心15min。
③取上清，再加入酚一氯仿各250μ，（这里不加异戊醇也可以么？）12000r/min离心15min，最后加入500μ氯仿，12000r离心15min，取上清。
④沉降（沉降多长时间？），加入无水乙醇iml，一20℃沉降20min后，12000r/min离心20min，弃上清。
⑤加入75%乙醇1ml，溶解沉淀，12000r/mln离心5min，弃上清(这里的上清根本看不出来)。
⑥倒置用滤纸干燥。
⑦加入30μ溶解沉淀，一20℃保存备用。
如果有哪位同行提取过艾美尔球虫的基因组DNA，也可以给个更详细的方案，多谢啦~！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
互相学习，共同进步
1楼 2012-08-30 15:22:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zdfang83

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 萌主李萌萌 at 2012-08-31 14:16:48
我们实验室没有组织研磨器。。。而且我不太明白量那么少能研磨吗？我冻融，超声都试过，之后的提取用过原平皓的试剂盒，也用过手工，效果都不好啊...

你取大量卵囊用饱和食盐水漂浮纯化一下，没有组织研磨机就用2ml的玻璃的组织匀浆器研磨半个小时，再根据基因组提取试剂盒说明书参照细胞DNA提取方法来提，应该没问题的，我之前也是这样做的，很容易就提出来了。玻璃的组织匀浆器在学校卖玻璃仪器的部门应该有的，实在没有就跟耗材公司买几个，很便宜的，买十个也用不了多少钱。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2012-08-31 20:08:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

zdfang83

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 金币+1, 鼓励 2012-08-31 07:28:12
我以前都是把纯化的卵囊不经反复冻融直接用组织研磨机打碎了，然后用TAKARA的通用基因组提取试剂盒照操作步骤来就行了，后来用其他试剂盒也很容易就提取出来了。
赞一下 回复此楼
2楼2012-08-30 22:18:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

萌主李萌萌

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zdfang83 at 2012-08-30 22:18:44
我以前都是把纯化的卵囊不经反复冻融直接用组织研磨机打碎了，然后用TAKARA的通用基因组提取试剂盒照操作步骤来就行了，后来用其他试剂盒也很容易就提取出来了。

我们实验室没有组织研磨器。。。而且我不太明白量那么少能研磨吗？我冻融，超声都试过，之后的提取用过原平皓的试剂盒，也用过手工，效果都不好啊
赞一下 回复此楼
互相学习，共同进步
3楼2012-08-31 14:13:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

萌主李萌萌

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zdfang83 at 2012-08-30 22:18:44
我以前都是把纯化的卵囊不经反复冻融直接用组织研磨机打碎了，然后用TAKARA的通用基因组提取试剂盒照操作步骤来就行了，后来用其他试剂盒也很容易就提取出来了。

我们实验室没有组织研磨器。。。而且我不太明白量那么少能研磨吗？我冻融，超声都试过，之后的提取用过原平皓的试剂盒，也用过手工，效果都不好啊
赞一下 回复此楼
互相学习，共同进步
4楼2012-08-31 14:16:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 22 350 本科985求调剂，求老登收留 +3 李轶男003 2026-03-20 3/150 2026-03-21 13:28 by 搏击518
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 0856材料专硕353求调剂 +3 NIFFFfff 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:23 by luoyongfeng
[考研] 085601调剂 358分 +3 zzzzggh 2026-03-20 4/200 2026-03-21 10:21 by luoyongfeng
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境总分308求调剂 +6 墨墨漠 2026-03-20 6/300 2026-03-21 09:23 by 天青等烟雨
[考研] 346求调剂[0856] +4 WayneLim327 2026-03-16 7/350 2026-03-21 04:02 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +6 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 7/350 2026-03-21 01:03 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +8 小材化本科 2026-03-18 8/400 2026-03-20 23:16 by JourneyLucky
[考研] 330求调剂 +4 小材化本科 2026-03-18 4/200 2026-03-20 23:13 by JourneyLucky
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +5 tcxiaoxx 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:35 by laoshidan
[考研] 本人考085602 化学工程 专硕 +19 不知道叫什么！ 2026-03-15 21/1050 2026-03-20 20:48 by zhukairuo
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
[考博] 申博26年 +3 八6八68 2026-03-19 3/150 2026-03-19 19:43 by nxgogo
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +9 一鸭鸭哟 2026-03-14 11/550 2026-03-19 17:22 by ！本暗一次！
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
[考研] 考研化学学硕调剂，一志愿985 +4 张vvvv 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:15 by ruiyingmiao
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:12 by ruiyingmiao
[考研] 290求调剂 +3 p asserby. 2026-03-15 4/200 2026-03-17 16:35 by wangkm
[考研] 11408 一志愿西电，277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭