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CTAB法与改良的CTAB法？
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| 第一次提DNA,想请教一下各位大侠，改良的CTAB法与CTAB法有什么区别？改进在哪里？可以提供原理步骤什么的攻略最好了。。。谢谢~~~ |
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
凌宫雪(myprayer代发): 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-22 20:49:10
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CTAB法原理 CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl)，CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸。通过有机溶剂抽提，去除蛋白，多糖，酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。 CTAB法步骤 1）取材料，加液氮研磨成粉末状，迅速移入1.5 ml Eppendorf管中；（2）加入800 μl的CTAB提取缓冲液，混匀（CTAB在65℃水浴预热），每5min轻轻震荡几次，20min后12000 r/min，离心15 min；（3）小心吸取上清液，加入等体积的酚：氯仿（各400μl）溶液，混匀，4℃，12000 r/min，离心10 min；（4）小心吸取上清液，加入等体积的氯仿，混匀，4℃，12000 r/min，离心10 min。（5）重复步骤（4）1-2次，以蛋白层不出现为止；（6）取上清，-20℃沉淀1h，4℃，12000 r/min，离心10 min；（7）弃去上清液，用70%乙醇洗涤沉淀2次；（8）室温下干燥后（一般干燥5-15 min），溶于30-50 μl DEPC去离子水中，于-20℃或者-70℃下保存备用。 改良CTAB法 一般来说，改良法是应用于多年生植物组织的DNA提取，含有较多的酚，多糖，硅质等，棉花和水稻的DNA提取也需要一定的修改。思路有两个，一方面尽量去除杂质、蛋白和脂类，另一方面加强DNA的沉淀效果。CTAB在高离子强度的溶液中可以与蛋白质、多糖等物质结合，而不与DNA结合，这里还可以添加一些还原剂比如β-巯基乙醇来避免褐化物质对DNA的影响。氯仿-异戊醇可以进一步使蛋白质变性分层并去除脂类。最后用低温预冷的无水乙醇或者异戊醇来沉淀DNA。 |
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