应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 提取植物DNA，求助~~~
221/1返回列表
查看: 3213  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Bella0224

金虫 (小有名气)

[交流] 提取植物DNA，求助~~~

新手一枚。。。

用试剂盒提取植物DNA，100mg样品，液氮研磨，可是总提不出来。。。（电泳跑胶来着，就marker亮，其他神马都木有）

请问大家用液氮研磨时是否要研磨20分钟左右才算是研磨充分呢？研磨过程中是否都要处于冷冻状态呢？

其他步骤都按照试剂盒走的啊。。。难道是过程中DNA被降解了？？？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-09-20 09:39:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

junminh

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
Bella0224(金币+1): 谢谢参与
gyfgood: 金币+2, 有帮助！ 2012-09-21 14:42:27
提的是啥植物哦，提不出来？？
量太多，一般20MG的组织就能提取10UG以上的DNA。
研磨不以时间来界限，加液氮3-5次研磨即3-5分钟就差不多了，看成粉沫状就OK了。DNA没有你想的那么脆弱，提不出来肯定是有原因的。分析下。
赞一下 回复此楼
2楼2012-09-20 10:17:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Bella0224

金虫 (小有名气)
因为之前木有做过，所以就拿身边的东南景天叶片练手来着。。。

今儿重新提了一次，加液氮磨了20分钟，用的100mg样品，最后泡胶除了marker其他地方一点亮带都木有，快哭了。。。

用的康为世纪的提植物DNA试剂盒，提了快5次了，一点木有。。。严格按照说明书了。。。

打算明儿给试剂公司打电话问问看。。。（会不会是试剂盒的问题啊？？？）
赞一下 回复此楼
4楼2012-09-20 17:40:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

junminh

铜虫 (小有名气)
详细描述下。
回复此楼
5楼2012-09-20 19:24:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

junminh

铜虫 (小有名气)
起始量太大，研磨时间不必那么长，究竟用啥试剂盒提的？详细按说明书操作一次。
赞一下 回复此楼
6楼2012-09-20 19:26:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

deepbluewater

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
Bella0224(金币+1): 谢谢参与
gyfgood: 金币+5, 很有帮助！ 2012-09-21 20:59:58
植物的话，真心不建议用试剂盒，因为植物当中的后含物，或其他物质对提取的干扰很大，比如我原来提取过一个植物中多糖和酚类很多，用试剂盒真心提不出来，后来是根据植物所含化学物质的特点改良设计了CTAB提取法，才能提取到不错的DNA，植物DNA相对于动物的来说还是要娇嫩一些，比较容易降解，所以你提取时要控制好裂解时间，和手部动作的力度。
赞一下 回复此楼
7楼2012-09-21 19:26:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

deepbluewater

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by Bella0224 at 2012-09-20 17:40:35
因为之前木有做过，所以就拿身边的东南景天叶片练手来着。。。

今儿重新提了一次，加液氮磨了20分钟，用的100mg样品，最后泡胶除了marker其他地方一点亮带都木有，快哭了。。。

用的康为世纪的提植物DNA试剂盒 ...

别着急，植物DNA真心不如动物DNA好提取，我做课题时也是弄了好久，都提不出来，当时也是很急，因为之前是做过的，竟然做不出来，挺自责的，结果导师还安慰我，有时候真的也跟周围气候什么有关，貌似我是国庆结束后没两天，就算不认真做都能提取出DNA来
赞一下 回复此楼
8楼2012-09-21 19:28:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangyubaoer

金虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主说的那种试剂盒我们没有用过，我们实验室用的是天根的，可以提出来。液氮研磨不是要看时间，是要看粉末研磨是否够细。楼上有人提到CTAB法，这的确是个好方法，效率比试剂盒好得多，楼主可以试试。
赞一下 回复此楼
9楼2012-09-21 19:37:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

robinho

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
问题不会出在前面研磨20分钟上，我动植物都提过，动物组织放在水浴锅了一夜都不会有事，DNA没那么脆弱，所以问题肯定还在在后面，尽量不雅试验试剂盒。这个过程很简单的。
赞一下 回复此楼
10楼2012-09-21 20:04:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖仅楼主可见
赞一下
11楼2012-09-23 07:11:06
已阅   申请APEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

Bella0224

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by deepbluewater at 2012-09-21 19:28:26
别着急，植物DNA真心不如动物DNA好提取，我做课题时也是弄了好久，都提不出来，当时也是很急，因为之前是做过的，竟然做不出来，挺自责的，结果导师还安慰我，有时候真的也跟周围气候什么有关，貌似我是国庆结束后 ...

真心感谢~~我最近快被这个急死了。。。马上要进行开题报告了，什么都还没弄出来。。。
赞一下 回复此楼
12楼2012-11-07 09:50:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

12101008

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
似乎提取DNA没那么难吧，研磨也不需要那么久的时间，还有就是你选的植物那个部位那个时期的组织呢？
赞一下 回复此楼
13楼2012-11-07 17:01:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

titus0805

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
提DNA就是样品量别大了，或者把裂解液的量提上去也行，方法里写的样品量一般都大，用不着研磨20分钟，一两分钟就够了。你要提细胞核建库那就另当别论了
赞一下 回复此楼
14楼2012-11-09 08:58:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zzz888

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主一直没说自己提的什么植物组织
提DNA没有你想想中那么麻烦的
我用天根的试剂盒
赞一下 回复此楼
15楼2012-11-09 13:14:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Bella0224

金虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by zzz888 at 2012-11-09 13:14:01
楼主一直没说自己提的什么植物组织
提DNA没有你想想中那么麻烦的
我用天根的试剂盒

东南景天的叶片组织，我们这边做血液和质粒的都用的天根，貌似还是这个牌子比较不错。。。。
赞一下 回复此楼
16楼2012-11-13 14:34:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Bella0224

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 彬心玉壶 at 2012-09-23 07:11:06
磨成粉末，不用花那么大力气，样品不用很多。
不要用试剂盒，浪费钱。经典的CTAB就可以了。
DNA很皮实，随便整。

他们都说DNA很皮实，估计是我手法不行吧，表示刚做实验半年而已。。。
赞一下 回复此楼
17楼2012-11-13 14:35:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

295446821

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
提取植物的DNA用经典的CTAB法就可以啊，其实点用的时候没必要点marker，浪费！
赞一下 回复此楼
18楼2013-09-17 09:11:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Ophiorrhiza

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by Bella0224 at 2012-09-20 17:40:35
因为之前木有做过，所以就拿身边的东南景天叶片练手来着。。。

今儿重新提了一次，加液氮磨了20分钟，用的100mg样品，最后泡胶除了marker其他地方一点亮带都木有，快哭了。。。

用的康为世纪的提植物DNA试剂盒 ...

最近我也在提取植物DNA，也是用康为世纪的试剂盒，提出的总DNA在跑胶中也是这样的。后来我去测浓度，一般都是10纳克/微升左右，浓度太低，扩增小片段600-1000bp没问题，但上两千就没则。
赞一下 回复此楼
19楼2014-09-20 11:43:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangqingxy

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主提出来了吗？我也在用康为的试剂盒，DNA也是提不出来，总是降解，RNA含量很高，郁闷死了
赞一下 回复此楼
20楼2014-12-23 21:17:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

马袋袋

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我现在开始做植物基因组试剂盒的研发，争取弄个好用的出来
赞一下 回复此楼
21楼2015-04-10 15:28:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

WQS1991

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by deepbluewater at 2012-09-21 19:26:04
植物的话，真心不建议用试剂盒，因为植物当中的后含物，或其他物质对提取的干扰很大，比如我原来提取过一个植物中多糖和酚类很多，用试剂盒真心提不出来，后来是根据植物所含化学物质的特点改良设计了CTAB提取法，才 ...

想问一下，你是怎么改良CTAB提取法的，具体细节能说一下吗？
赞一下 回复此楼
22楼2015-04-19 21:06:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
yingying15883楼
2012-09-20 16:29   回复  
Bella0224(金币+1): 谢谢参与
相关版块跳转 我要订阅楼主 Bella0224 的主题更新
221/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿北京化工大学 070300 学硕 336分 求调剂 +4 vv迷 2026-03-22 4/200 2026-03-22 23:29 by king123！
[考研] 311求调剂 +6 冬十三 2026-03-18 6/300 2026-03-22 20:18 by edmund7
[考研] 求调剂 +6 十三加油 2026-03-21 6/300 2026-03-22 17:00 by i_cooler
[考研] 319求调剂 +4 小力气珂珂 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:53 by ColorlessPI
[考研] 070300化学求调剂 +3 苑豆豆 2026-03-20 3/150 2026-03-22 14:48 by ColorlessPI
[考研] 一志愿北京化工大学070300 学硕336求调剂 +5 vv迷 2026-03-21 8/400 2026-03-22 14:20 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +3 13341 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:28 by 学员8dgXkO
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-18 3/150 2026-03-21 17:31 by ColorlessPI
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[基金申请] 学校已经提交到NSFC，还能修改吗？ 40+4 babangida 2026-03-19 9/450 2026-03-21 16:12 by babangida
[考研] 070300化学319求调剂 +7 锦鲤0909 2026-03-17 7/350 2026-03-21 03:46 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华南师大 070300（化学）304分求调剂 +3 0703武芊慧雪304 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:48 by JourneyLucky
[考研] 材料专业求调剂 +6 hanamiko 2026-03-18 6/300 2026-03-21 00:24 by JourneyLucky
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 321求调剂 +9 何润采123 2026-03-18 11/550 2026-03-20 23:19 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武汉理工材料工程专硕调剂 +9 Doleres 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:36 by JourneyLucky
[考研] 288求调剂，一志愿华南理工大学071005 +5 ioodiiij 2026-03-17 5/250 2026-03-19 18:22 by zcl123
[考研] 【同济软件】软件（085405）考研求调剂 +3 2026eternal 2026-03-18 3/150 2026-03-18 19:09 by 搏击518
[考研] 11408 一志愿西电，277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭