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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 提取植物DNA，求助~~~
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Bella0224

金虫 (小有名气)

[交流] 提取植物DNA，求助~~~

新手一枚。。。

用试剂盒提取植物DNA，100mg样品，液氮研磨，可是总提不出来。。。（电泳跑胶来着，就marker亮，其他神马都木有）

请问大家用液氮研磨时是否要研磨20分钟左右才算是研磨充分呢？研磨过程中是否都要处于冷冻状态呢？

其他步骤都按照试剂盒走的啊。。。难道是过程中DNA被降解了？？？
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1楼 2012-09-20 09:39:02
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Bella0224

金虫 (小有名气)
因为之前木有做过，所以就拿身边的东南景天叶片练手来着。。。

今儿重新提了一次，加液氮磨了20分钟，用的100mg样品，最后泡胶除了marker其他地方一点亮带都木有，快哭了。。。

用的康为世纪的提植物DNA试剂盒，提了快5次了，一点木有。。。严格按照说明书了。。。

打算明儿给试剂公司打电话问问看。。。（会不会是试剂盒的问题啊？？？）
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4楼2012-09-20 17:40:35
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junminh

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
Bella0224(金币+1): 谢谢参与
gyfgood: 金币+2, 有帮助！ 2012-09-21 14:42:27
提的是啥植物哦，提不出来？？
量太多，一般20MG的组织就能提取10UG以上的DNA。
研磨不以时间来界限，加液氮3-5次研磨即3-5分钟就差不多了，看成粉沫状就OK了。DNA没有你想的那么脆弱，提不出来肯定是有原因的。分析下。
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2楼2012-09-20 10:17:54
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junminh

铜虫 (小有名气)
起始量太大，研磨时间不必那么长，究竟用啥试剂盒提的？详细按说明书操作一次。
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6楼2012-09-20 19:26:17
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deepbluewater

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
Bella0224(金币+1): 谢谢参与
gyfgood: 金币+5, 很有帮助！ 2012-09-21 20:59:58
植物的话，真心不建议用试剂盒，因为植物当中的后含物，或其他物质对提取的干扰很大，比如我原来提取过一个植物中多糖和酚类很多，用试剂盒真心提不出来，后来是根据植物所含化学物质的特点改良设计了CTAB提取法，才能提取到不错的DNA，植物DNA相对于动物的来说还是要娇嫩一些，比较容易降解，所以你提取时要控制好裂解时间，和手部动作的力度。
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7楼2012-09-21 19:26:04
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