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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 提取植物DNA，求助~~~
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Bella0224

金虫 (小有名气)

[交流] 提取植物DNA，求助~~~

新手一枚。。。

用试剂盒提取植物DNA，100mg样品，液氮研磨，可是总提不出来。。。（电泳跑胶来着，就marker亮，其他神马都木有）

请问大家用液氮研磨时是否要研磨20分钟左右才算是研磨充分呢？研磨过程中是否都要处于冷冻状态呢？

其他步骤都按照试剂盒走的啊。。。难道是过程中DNA被降解了？？？
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1楼 2012-09-20 09:39:02
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junminh

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
Bella0224(金币+1): 谢谢参与
gyfgood: 金币+2, 有帮助！ 2012-09-21 14:42:27
提的是啥植物哦，提不出来？？
量太多，一般20MG的组织就能提取10UG以上的DNA。
研磨不以时间来界限，加液氮3-5次研磨即3-5分钟就差不多了，看成粉沫状就OK了。DNA没有你想的那么脆弱，提不出来肯定是有原因的。分析下。
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2楼2012-09-20 10:17:54
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Bella0224

金虫 (小有名气)
因为之前木有做过，所以就拿身边的东南景天叶片练手来着。。。

今儿重新提了一次，加液氮磨了20分钟，用的100mg样品，最后泡胶除了marker其他地方一点亮带都木有，快哭了。。。

用的康为世纪的提植物DNA试剂盒，提了快5次了，一点木有。。。严格按照说明书了。。。

打算明儿给试剂公司打电话问问看。。。（会不会是试剂盒的问题啊？？？）
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4楼2012-09-20 17:40:35
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junminh

铜虫 (小有名气)
详细描述下。
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5楼2012-09-20 19:24:11
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junminh

铜虫 (小有名气)
起始量太大，研磨时间不必那么长，究竟用啥试剂盒提的？详细按说明书操作一次。
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6楼2012-09-20 19:26:17
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deepbluewater

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
Bella0224(金币+1): 谢谢参与
gyfgood: 金币+5, 很有帮助！ 2012-09-21 20:59:58
植物的话，真心不建议用试剂盒，因为植物当中的后含物，或其他物质对提取的干扰很大，比如我原来提取过一个植物中多糖和酚类很多，用试剂盒真心提不出来，后来是根据植物所含化学物质的特点改良设计了CTAB提取法，才能提取到不错的DNA，植物DNA相对于动物的来说还是要娇嫩一些，比较容易降解，所以你提取时要控制好裂解时间，和手部动作的力度。
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7楼2012-09-21 19:26:04
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deepbluewater

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by Bella0224 at 2012-09-20 17:40:35
因为之前木有做过，所以就拿身边的东南景天叶片练手来着。。。

今儿重新提了一次，加液氮磨了20分钟，用的100mg样品，最后泡胶除了marker其他地方一点亮带都木有，快哭了。。。

用的康为世纪的提植物DNA试剂盒 ...

别着急，植物DNA真心不如动物DNA好提取，我做课题时也是弄了好久，都提不出来，当时也是很急，因为之前是做过的，竟然做不出来，挺自责的，结果导师还安慰我，有时候真的也跟周围气候什么有关，貌似我是国庆结束后没两天，就算不认真做都能提取出DNA来
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8楼2012-09-21 19:28:26
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xiangyubaoer

金虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主说的那种试剂盒我们没有用过，我们实验室用的是天根的，可以提出来。液氮研磨不是要看时间，是要看粉末研磨是否够细。楼上有人提到CTAB法，这的确是个好方法，效率比试剂盒好得多，楼主可以试试。
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9楼2012-09-21 19:37:51
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robinho

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
问题不会出在前面研磨20分钟上，我动植物都提过，动物组织放在水浴锅了一夜都不会有事，DNA没那么脆弱，所以问题肯定还在在后面，尽量不雅试验试剂盒。这个过程很简单的。
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10楼2012-09-21 20:04:49
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匿名

用户注销 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖仅楼主可见
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11楼2012-09-23 07:11:06
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Bella0224

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by deepbluewater at 2012-09-21 19:28:26
别着急，植物DNA真心不如动物DNA好提取，我做课题时也是弄了好久，都提不出来，当时也是很急，因为之前是做过的，竟然做不出来，挺自责的，结果导师还安慰我，有时候真的也跟周围气候什么有关，貌似我是国庆结束后 ...

真心感谢~~我最近快被这个急死了。。。马上要进行开题报告了，什么都还没弄出来。。。
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12楼2012-11-07 09:50:27
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12101008

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
似乎提取DNA没那么难吧，研磨也不需要那么久的时间，还有就是你选的植物那个部位那个时期的组织呢？
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13楼2012-11-07 17:01:42
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titus0805

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
提DNA就是样品量别大了，或者把裂解液的量提上去也行，方法里写的样品量一般都大，用不着研磨20分钟，一两分钟就够了。你要提细胞核建库那就另当别论了
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14楼2012-11-09 08:58:14
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zzz888

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主一直没说自己提的什么植物组织
提DNA没有你想想中那么麻烦的
我用天根的试剂盒
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15楼2012-11-09 13:14:01
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Bella0224

金虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by zzz888 at 2012-11-09 13:14:01
楼主一直没说自己提的什么植物组织
提DNA没有你想想中那么麻烦的
我用天根的试剂盒

东南景天的叶片组织，我们这边做血液和质粒的都用的天根，貌似还是这个牌子比较不错。。。。
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16楼2012-11-13 14:34:55
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Bella0224

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 彬心玉壶 at 2012-09-23 07:11:06
磨成粉末，不用花那么大力气，样品不用很多。
不要用试剂盒，浪费钱。经典的CTAB就可以了。
DNA很皮实，随便整。

他们都说DNA很皮实，估计是我手法不行吧，表示刚做实验半年而已。。。
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17楼2012-11-13 14:35:36
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295446821

银虫 (初入文坛)
★
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提取植物的DNA用经典的CTAB法就可以啊，其实点用的时候没必要点marker，浪费！
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18楼2013-09-17 09:11:02
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Ophiorrhiza

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by Bella0224 at 2012-09-20 17:40:35
因为之前木有做过，所以就拿身边的东南景天叶片练手来着。。。

今儿重新提了一次，加液氮磨了20分钟，用的100mg样品，最后泡胶除了marker其他地方一点亮带都木有，快哭了。。。

用的康为世纪的提植物DNA试剂盒 ...

最近我也在提取植物DNA，也是用康为世纪的试剂盒，提出的总DNA在跑胶中也是这样的。后来我去测浓度，一般都是10纳克/微升左右，浓度太低，扩增小片段600-1000bp没问题，但上两千就没则。
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19楼2014-09-20 11:43:24
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yangqingxy

铜虫 (小有名气)
★
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楼主提出来了吗？我也在用康为的试剂盒，DNA也是提不出来，总是降解，RNA含量很高，郁闷死了
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20楼2014-12-23 21:17:40
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马袋袋

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我现在开始做植物基因组试剂盒的研发，争取弄个好用的出来
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21楼2015-04-10 15:28:41
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WQS1991

银虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
7楼: Originally posted by deepbluewater at 2012-09-21 19:26:04
植物的话，真心不建议用试剂盒，因为植物当中的后含物，或其他物质对提取的干扰很大，比如我原来提取过一个植物中多糖和酚类很多，用试剂盒真心提不出来，后来是根据植物所含化学物质的特点改良设计了CTAB提取法，才 ...

想问一下，你是怎么改良CTAB提取法的，具体细节能说一下吗？
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22楼2015-04-19 21:06:09
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yingying15883楼
2012-09-20 16:29   回复  
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