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christll新虫 (初入文坛)
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[求助]
CTAB法提取真菌DNA的求助
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我做的是白腐真菌DNA的提取，用于全基因组的测序。由于该菌大量产硬葡聚糖，所以操作中会有去除多糖的步骤。各位大神，我都忙活了一学期了，一直重复，一直失败。请大神们指点迷津，不胜感激！ 具体步骤如下： 1、取250mg菌体液氮石英砂充分碾磨，装入10ml离心管； 2、加入3mlCTAB提取液，60ul ß-巯基乙醇，剧烈振荡至样品分散均匀； 65℃水浴30min，其间颠倒2-3次； 3、加入1ml无水乙醇及1ml 5M KAC，充分混匀，冰上放置1h； 至室温后，加入3ml 氯仿异戊醇（24:1），充分混匀； 12000rpm，10min, 4℃； 4、取上清，加入等体积的碱酚氯仿异戊醇（25:24:1）,充分混合； 12000rpm，10min, 4℃； 5、重复7、8步骤，至界面无明显杂质； 6、氯仿异戊醇（24:1）再一次抽提； 7、上清液加入10% v/v的3M KAC及2.5倍体积的无水乙醇，颠倒混匀，挑出絮状沉淀， 沉淀用75%乙醇漂洗2次，真空干燥； 8、100ul ddH2O溶解DNA，10ul RNase (10ug/ul)20min;\ 9、电泳检测。 醇沉淀的时候出现大量白色絮状物，貌似DNA的絮状物，75%乙醇漂洗之后，真空烘干后稍微有点难溶。然后就是跑胶，跑胶结果如附件：（每次结果都差不多，一直找不到问题在哪儿） |
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2013-08-17 20:11:34, 1.44 M
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