应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » CTAB法提取真菌DNA的求助
51/1返回列表
查看: 3021  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

christll

新虫 (初入文坛)

[求助] CTAB法提取真菌DNA的求助

我做的是白腐真菌DNA的提取，用于全基因组的测序。由于该菌大量产硬葡聚糖，所以操作中会有去除多糖的步骤。各位大神，我都忙活了一学期了，一直重复，一直失败。请大神们指点迷津，不胜感激！
具体步骤如下：
1、取250mg菌体液氮石英砂充分碾磨，装入10ml离心管；
2、加入3mlCTAB提取液，60ul ß-巯基乙醇，剧烈振荡至样品分散均匀；
65℃水浴30min，其间颠倒2-3次；
3、加入1ml无水乙醇及1ml 5M KAC，充分混匀，冰上放置1h；
至室温后，加入3ml 氯仿异戊醇（24:1），充分混匀；
12000rpm，10min, 4℃；
4、取上清，加入等体积的碱酚氯仿异戊醇（25:24:1）,充分混合；
12000rpm，10min, 4℃；
5、重复7、8步骤，至界面无明显杂质；
6、氯仿异戊醇（24:1）再一次抽提；
7、上清液加入10% v/v的3M KAC及2.5倍体积的无水乙醇，颠倒混匀，挑出絮状沉淀， 沉淀用75%乙醇漂洗2次，真空干燥；
8、100ul ddH2O溶解DNA，10ul RNase (10ug/ul)20min;\
9、电泳检测。
醇沉淀的时候出现大量白色絮状物，貌似DNA的絮状物，75%乙醇漂洗之后，真空烘干后稍微有点难溶。然后就是跑胶，跑胶结果如附件：（每次结果都差不多，一直找不到问题在哪儿）
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : 跑胶图片.doc
    • 2013-08-17 20:11:34, 1.44 M

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-08-17 20:20:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nmzyl

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by longrna at 2013-08-19 08:42:13
你的gDNA已成功提取。即前面很淡的条带即为DNA：但量少。由于你处理的过程经过你所谓的多步去多糖步骤导致提取产量低。
絮状物就是DNA（可能含有杂质）。
跑胶前面的大量小片段为RNA（该样品RNA含量应该很丰富，虽 ...

你好，请问我在提的时候基本也是这样，加冷的乙醇就出现白的絮状物，可是一离心，什么也没有了。不知道什么原因？恳请赐教，谢谢！
赞一下 回复此楼
美好一天从好心情开始
5楼2015-09-27 16:04:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

yimingwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
christll(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-19 18:33:54
那一陀就是糖。建议你第7步步要挑出沉淀，而是12000rpm, 15 min, 水溶解。不溶解的部分直接丢掉。把溶解的部分再用PCI，Chloroform纯化，沉淀。就能得到好点的Genomic DNA了。
赞一下 回复此楼
Let'sdoit.
2楼2013-08-18 00:49:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

christll

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yimingwang at 2013-08-18 00:49:09
那一陀就是糖。建议你第7步步要挑出沉淀，而是12000rpm, 15 min, 水溶解。不溶解的部分直接丢掉。把溶解的部分再用PCI，Chloroform纯化，沉淀。就能得到好点的Genomic DNA了。

其实我之前做过将絮状物沉淀溶解之后再用酚氯仿抽提的，一用醇沉淀还是那种絮状物，再次跑胶的时候也还是图片的那种情况。我现在就是搞不清楚提取出来的絮状物具体是什么，为什么跑胶出来前面有大量的小片段，DNA是压根没提取出来还是降解掉了。。。。找不到原因
赞一下 回复此楼
3楼2013-08-18 17:12:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
christll(gyesang代发): 金币+2, 鼓励交流！ 2013-08-19 18:34:00
你的gDNA已成功提取。即前面很淡的条带即为DNA：但量少。由于你处理的过程经过你所谓的多步去多糖步骤导致提取产量低。
絮状物就是DNA（可能含有杂质）。
跑胶前面的大量小片段为RNA（该样品RNA含量应该很丰富，虽然后来有加RNase但去除还不完全。可以在65度水浴时即加入RNase处理。）
赞一下(1人) 回复此楼
伟大航线....
4楼2013-08-19 08:42:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 321求调剂 +3 大米饭！ 2026-03-15 3/150 2026-03-15 17:48 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历，论文在投 +3 腻腻gk 2026-03-14 3/150 2026-03-15 17:28 by 小物理化学
[基金申请] 现在如何回避去年的某一个专家，不知道名字 +3 zk200107 2026-03-12 6/300 2026-03-14 17:13 by zk200107
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +5 鹤遨予卿 2026-03-09 5/250 2026-03-14 02:44 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 清风问长安 2026-03-09 3/150 2026-03-14 02:15 by JourneyLucky
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工296分求调剂 +16 稻妻小编 2026-03-09 18/900 2026-03-14 02:00 by JourneyLucky
[考研] 求调剂！ +4 朔朔话 2026-03-09 4/200 2026-03-14 01:38 by JourneyLucky
[考研] 0703求调剂 +7 jtyq001 2026-03-10 7/350 2026-03-14 01:06 by JourneyLucky
[考研] 材料工程专硕，一志愿中国矿业大学，总分314，求调剂 +5 无懈可击的巨人 2026-03-10 5/250 2026-03-14 00:37 by JourneyLucky
[考研] 321求调剂 +3 CUcat 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:25 by JourneyLucky
[考研] 279求调剂 +3 抓着星星的女孩 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:47 by userper
[考研] 341求调剂 +4 番茄头--- 2026-03-10 4/200 2026-03-13 23:12 by JourneyLucky
[考研] 四川大学085601材料工程专硕 初试294求调剂 +4 祝我们好在冬天 2026-03-11 4/200 2026-03-13 21:39 by peike
[考研] 0703化学求调剂 +7 绿豆芹菜汤 2026-03-12 7/350 2026-03-13 17:25 by njzyff
[考研] 求调剂 +3 程雨杭 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:06 by JourneyLucky
[考研] 328化工专硕求调剂 +4 。，。，。，。i 2026-03-12 4/200 2026-03-13 14:44 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 资源与环境 285 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:31 by houyaoxu
[考研] 08食品或轻工求调剂，本科发表3篇sci一区top论文，一志愿南师大食品科学与工程 +3 我是一个兵， 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:21 by Yuyi.
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-12 4/200 2026-03-12 19:33 by 求调剂zz
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭