| 查看: 3020 | 回复: 4 | |||
christll新虫 (初入文坛)
|
[求助]
CTAB法提取真菌DNA的求助
|
|
我做的是白腐真菌DNA的提取，用于全基因组的测序。由于该菌大量产硬葡聚糖，所以操作中会有去除多糖的步骤。各位大神，我都忙活了一学期了，一直重复，一直失败。请大神们指点迷津，不胜感激！ 具体步骤如下： 1、取250mg菌体液氮石英砂充分碾磨，装入10ml离心管； 2、加入3mlCTAB提取液，60ul ß-巯基乙醇，剧烈振荡至样品分散均匀； 65℃水浴30min，其间颠倒2-3次； 3、加入1ml无水乙醇及1ml 5M KAC，充分混匀，冰上放置1h； 至室温后，加入3ml 氯仿异戊醇（24:1），充分混匀； 12000rpm，10min, 4℃； 4、取上清，加入等体积的碱酚氯仿异戊醇（25:24:1）,充分混合； 12000rpm，10min, 4℃； 5、重复7、8步骤，至界面无明显杂质； 6、氯仿异戊醇（24:1）再一次抽提； 7、上清液加入10% v/v的3M KAC及2.5倍体积的无水乙醇，颠倒混匀，挑出絮状沉淀， 沉淀用75%乙醇漂洗2次，真空干燥； 8、100ul ddH2O溶解DNA，10ul RNase (10ug/ul)20min;\ 9、电泳检测。 醇沉淀的时候出现大量白色絮状物，貌似DNA的絮状物，75%乙醇漂洗之后，真空烘干后稍微有点难溶。然后就是跑胶，跑胶结果如附件：（每次结果都差不多，一直找不到问题在哪儿） |
回复此楼» 本帖附件资源列表
-
欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com - 附件 1 : 跑胶图片.doc
2013-08-17 20:11:34, 1.44 M
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有259人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 提取植物DNA的CTAB缓冲液，里面的PVP有什么要求？
已经有4人回复
- CTAB法与改良的CTAB法？
已经有4人回复
- 为何CTAB法提取的DNA总是断裂？
已经有40人回复
- CTAB法提取RNA,电泳后完全无条带
已经有5人回复
- 关于DNA提取的一些问题
已经有13人回复
- 求助！关于革兰氏阳性菌DNA提取的问题
已经有31人回复
- CTAB法提取DNA
已经有19人回复
- DNA 3' 5'问题
已经有5人回复
- 在用CTAB法提取曲霉总DNA时，提取很多次没有成功，期望大家多多帮助。
已经有16人回复
- 求助！！真菌拮抗试验
已经有13人回复
- 求助——真菌DNA提取
已经有11人回复
- 求助：真菌常用的染色法
已经有6人回复
- CTAB法提取RNA
已经有12人回复
- CTAB 基因提取方法的问题
已经有10人回复
- 真菌基因组DAN提取图片，求高人指点
已经有20人回复
- 标本提取DNA
已经有4人回复
- CTAB提取细菌DNA
已经有15人回复
- 丝状真菌提取总DNA问题
已经有14人回复
- 【求助/交流】高盐低PH法提取种子DNA的原理
已经有9人回复
- 【求助/交流】提取真菌DNA或RNA一定要液氮研磨吗？
已经有7人回复
- 【求助/交流】提取的DNA纯度不好
已经有10人回复
- 【求助/交流】急！ 帮忙分析下CTAB法提取真菌DNA的电泳图
已经有4人回复
- 【求助/交流】异硫氰酸胍法提取植物RNA中DNA残留问题~回帖就送币！！！
已经有14人回复
- 【求助/交流】细菌基因组DNA的提取法（CTAB/NaCl 法）,提取的DNA是否为细菌总DNA? 非�
已经有11人回复
- 【求助/交流】CTAB怎样溶解啊
已经有16人回复
yimingwang
金虫 (小有名气)
- 应助: 61 (初中生)
- 金币: 566.5
- 红花: 6
- 帖子: 142
- 在线: 32.9小时
- 虫号: 1192378
- 注册: 2011-01-19
- 性别: GG
- 专业: 植物保护生物技术
2楼2013-08-18 00:49:09
christll
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 0.3
- 散金: 6
- 帖子: 25
- 在线: 43.7小时
- 虫号: 1676928
- 注册: 2012-03-09
- 专业: 微生物资源与分类学
3楼2013-08-18 17:12:21
4楼2013-08-19 08:42:13
5楼2015-09-27 16:04:36
