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【求助/交流】CTAB法提DNA时研磨一定要在低温进行吗？ 已有6人参与
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RT不知道常温研磨会不会有什么影响啊？比如说产量？ 还有研磨后水浴之后，是先离心再加氯仿异戊醇还是直接加再离心？急~~ |
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7楼2011-03-24 22:43:32
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丝状真菌基因组DNA的提取（CTAB法） — 取幼嫩的菌丝体，用液氮研成粉末，每 0.8 g 装入 10 mL 的离心管中； — 预热 1.5×CTAB 到 95 ℃，加 2 mL 到装有菌丝粉末的离心管中，混匀； — 立即置于 65 ℃ 水浴 30 min，每分钟，上下颠倒 1 次； — 12000 g 离心 5 分钟； — 吸取上清液，加等体积的氯仿，上下颠倒数次；12000 g 离心 5 分钟； — 吸取上清液，加等体积的酚，上下颠倒数次；12000 g 离心 5 分钟； — 吸取上清液，加等体积的氯仿，上下颠倒数次；12000 g 离心 5 分钟； — 取上清，加入 2 倍体积的无水乙醇和 1/10 体积的 10 M NH4Ac，混匀，室温放置 10 min； — 12000 g 离心 10 分钟，去上清，用 75% 乙醇洗沉淀，自然干燥； — 加 100uL 的 TE 或无菌水。 楼主，我也是做真菌转化的，有好的东西一起分享哈O(∩_∩)O~ |
8楼2011-03-25 13:37:53
9楼2012-09-19 11:27:04
