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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】CTAB法提DNA时研磨一定要在低温进行吗？
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冰鱼儿

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】CTAB法提DNA时研磨一定要在低温进行吗？ 已有6人参与

RT不知道常温研磨会不会有什么影响啊？比如说产量？
还有研磨后水浴之后，是先离心再加氯仿异戊醇还是直接加再离心？急~~
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1楼 2011-03-18 15:17:37
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棒哈哈

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
丝状真菌基因组DNA的提取（CTAB法）
— 取幼嫩的菌丝体，用液氮研成粉末，每 0.8 g 装入 10 mL 的离心管中；
— 预热 1.5×CTAB 到 95 ℃，加 2 mL 到装有菌丝粉末的离心管中，混匀；
— 立即置于 65 ℃ 水浴 30 min，每分钟，上下颠倒 1 次；
— 12000 g 离心 5 分钟；
—        吸取上清液，加等体积的氯仿，上下颠倒数次；12000 g 离心 5 分钟；
—        吸取上清液，加等体积的酚，上下颠倒数次；12000 g 离心 5 分钟；
—        吸取上清液，加等体积的氯仿，上下颠倒数次；12000 g 离心 5 分钟；
— 取上清，加入 2 倍体积的无水乙醇和 1/10 体积的 10 M NH4Ac，混匀，室温放置 10 min；
— 12000 g 离心 10 分钟，去上清，用 75% 乙醇洗沉淀，自然干燥；
— 加 100uL 的 TE 或无菌水。
楼主，我也是做真菌转化的，有好的东西一起分享哈O(∩_∩)O~
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8楼2011-03-25 13:37:53
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