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冰鱼儿

金虫 (正式写手)

应助: 1 (幼儿园)
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在线: 193.5小时
虫号: 1151579
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性别: MM
专业: 微生物资源与分类学

[交流] 【求助/交流】CTAB法提DNA时研磨一定要在低温进行吗？已有6人参与

RT不知道常温研磨会不会有什么影响啊？比如说产量？
还有研磨后水浴之后，是先离心再加氯仿异戊醇还是直接加再离心？急~~

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【求助/交流】细菌基因组DNA的提取法（CTAB/NaCl 法）,提取的DNA是否为细菌总DNA? 非� 已经有11人回复

1楼 2011-03-18 15:17:37

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

棒哈哈

铁虫 (小有名气)

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虫号: 1090948
注册: 2010-09-06
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★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

丝状真菌基因组DNA的提取（CTAB法）
— 取幼嫩的菌丝体，用液氮研成粉末，每 0.8 g 装入 10 mL 的离心管中；
— 预热 1.5×CTAB 到 95 ℃，加 2 mL 到装有菌丝粉末的离心管中，混匀；
— 立即置于 65 ℃ 水浴 30 min，每分钟，上下颠倒 1 次；
— 12000 g 离心 5 分钟；
— 吸取上清液，加等体积的氯仿，上下颠倒数次；12000 g 离心 5 分钟；
— 吸取上清液，加等体积的酚，上下颠倒数次；12000 g 离心 5 分钟；
— 吸取上清液，加等体积的氯仿，上下颠倒数次；12000 g 离心 5 分钟；
— 取上清，加入 2 倍体积的无水乙醇和 1/10 体积的 10 M NH4Ac，混匀，室温放置 10 min；
— 12000 g 离心 10 分钟，去上清，用 75% 乙醇洗沉淀，自然干燥；
— 加 100uL 的 TE 或无菌水。
楼主，我也是做真菌转化的，有好的东西一起分享哈O(∩_∩)O~