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【求助/交流】CTAB法提DNA时研磨一定要在低温进行吗? 已有6人参与
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RT不知道常温研磨会不会有什么影响啊?比如说产量? 还有研磨后水浴之后,是先离心再加氯仿异戊醇还是直接加再离心?急~~ |
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starseacow
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7楼2011-03-24 22:43:32
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丝状真菌基因组DNA的提取(CTAB法) — 取幼嫩的菌丝体,用液氮研成粉末,每 0.8 g 装入 10 mL 的离心管中; — 预热 1.5×CTAB 到 95 ℃,加 2 mL 到装有菌丝粉末的离心管中,混匀; — 立即置于 65 ℃ 水浴 30 min,每分钟,上下颠倒 1 次; — 12000 g 离心 5 分钟; — 吸取上清液,加等体积的氯仿,上下颠倒数次;12000 g 离心 5 分钟; — 吸取上清液,加等体积的酚,上下颠倒数次;12000 g 离心 5 分钟; — 吸取上清液,加等体积的氯仿,上下颠倒数次;12000 g 离心 5 分钟; — 取上清,加入 2 倍体积的无水乙醇和 1/10 体积的 10 M NH4Ac,混匀,室温放置 10 min; — 12000 g 离心 10 分钟,去上清,用 75% 乙醇洗沉淀,自然干燥; — 加 100uL 的 TE 或无菌水。 楼主,我也是做真菌转化的,有好的东西一起分享哈O(∩_∩)O~ |
8楼2011-03-25 13:37:53
9楼2012-09-19 11:27:04










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