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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » DNA提取质量与DNA模板浓度问题
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lzbull

木虫 (小有名气)

[求助] DNA提取质量与DNA模板浓度问题 已有6人参与

小弟新手做分子，提了些DNA，有些问题还想请教一下大家。
从材料中提了DNA，跑电泳亮度不高。用紫外分光光度计测了一下，如下表，浓度都不高。而且有个问题是260/230有些出现负值，这个是怎么回事？这样DNA还能用来做模板进行PCR吗？主要是材料现在没有了，也不好重弄。
再有一个问题是一般做PCR的话DNA模板浓度最少是多少就可以了？比如说20ul体系至少加多少纳克DNA模板？
谢谢大家了。
DNA提取质量与DNA模板浓度问题
dna.png
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1楼 2014-02-27 15:16:57
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-02-28 11:49:19
....
    不知你用的什么方法，什么材料。
    如果你用CTAB法，针对普通（不含过量多酚、多脂肪类）植物材料的话，我的推断如下。
    仅从数值上来看，260/280过低，你抽提过程有问题，可能吸到有机相了，260/280过低，75%乙醇洗过后没有晾干净。
    材料出来的浓度是次要，你质量不过关的话，做PCR怎么都费劲。
    个人见解，欢迎高手指点，预祝实验顺利
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Let God do with it as He wills
3楼2014-02-27 15:22:35
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jackhua17

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lzbull: 金币+3, ★★★很有帮助, 非常感谢。 2014-03-02 14:08:19
本帖内容被屏蔽
9楼2014-03-02 06:13:31
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普通回帖

HYZ221314

至尊木虫 (职业作家)

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lzbull: 金币+2, ★有帮助, 谢谢 2014-02-27 21:06:51
我一般20ul加一百纳克左右；可以试试进行PCR，具体原因不知道

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青山不断，绿水长流
2楼2014-02-27 15:20:59
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lzbull

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by atlanticwi at 2014-02-27 15:22:35
....
    不知你用的什么方法，什么材料。
    如果你用CTAB法，针对普通（不含过量多酚、多脂肪类）植物材料的话，我的推断如下。
    仅从数值上来看，260/280过低，你抽提过程有问题，可能吸到有机相了，260/ ...

谢谢。我是用试剂盒提取的。乙醇洗过后在通风橱里晾了10分钟。应该差不多了吧，说明书上写的数分钟即可。
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4楼2014-02-27 21:08:23
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lzbull

木虫 (小有名气)
求教。
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5楼2014-02-28 09:05:57
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lzbull

木虫 (小有名气)
求指导
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6楼2014-02-28 14:21:38
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lzbull: 金币+5, ★★★很有帮助, 非常感谢 2014-03-01 22:53:24
你稍微取些样跑个琼脂糖胶看看，我听卖试剂盒的说用试剂盒中buffer洗脱的DNA测浓度不准。PCR 20微升体系百十纳克DNA就好。
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hehe
7楼2014-02-28 21:02:52
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lzbull

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-02-28 21:02:52
你稍微取些样跑个琼脂糖胶看看，我听卖试剂盒的说用试剂盒中buffer洗脱的DNA测浓度不准。PCR 20微升体系百十纳克DNA就好。

谢谢。我跑过电泳，亮度确实不高。百十纳克大概是多少？20微升体系10~20纳克够吗？
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8楼2014-03-01 22:53:10
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wangguosing

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
4楼: Originally posted by lzbull at 2014-02-27 21:08:23
谢谢。我是用试剂盒提取的。乙醇洗过后在通风橱里晾了10分钟。应该差不多了吧，说明书上写的数分钟即可。...

我觉得干燥是去除乙醇，十多分钟就够，

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10楼2014-03-02 07:20:22
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